| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-24页 |
| 1 猪体细胞克隆的意义 | 第16页 |
| 2 猪体细胞克隆的研究进展 | 第16-17页 |
| 3 影响猪体细胞核移植的因素 | 第17-24页 |
| ·核供体细胞 | 第17-18页 |
| ·胞质受体细胞 | 第18-19页 |
| ·去核 | 第19-20页 |
| ·细胞核转移 | 第20页 |
| ·激活 | 第20-21页 |
| ·胚胎培养 | 第21-22页 |
| ·克隆胚的重编程 | 第22-24页 |
| 第二章 供核体细胞系的建立 | 第24-34页 |
| 1 材料与方法 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要仪器耗材及试剂 | 第24-25页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·成年猪耳成纤维细胞系建立 | 第26页 |
| ·胎儿成纤维细胞系建立 | 第26-27页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞系建立 | 第27页 |
| ·猪输卵管上皮细胞系建立 | 第27-28页 |
| ·细胞传代培养 | 第28页 |
| ·供体细胞液氮冷冻储存 | 第28页 |
| ·供体细胞的复苏 | 第28-29页 |
| ·细胞染色体计数分析 | 第29页 |
| ·细胞生长曲线 | 第29页 |
| ·供体细胞细胞周期同步化 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-31页 |
| ·猪各种类型细胞系的建立 | 第29-30页 |
| ·耳成纤维细胞系 | 第29-30页 |
| ·胎儿成纤维细胞系 | 第30页 |
| ·卵巢颗粒细胞系 | 第30页 |
| ·输卵管上皮细胞 | 第30页 |
| ·细胞活力检测 | 第30页 |
| ·胎儿成纤维细胞染色体数目 | 第30页 |
| ·胎儿成纤维细胞生长曲线 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 转EGFP供核体细胞的制备 | 第34-42页 |
| 1 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第34-35页 |
| ·溶液的配制 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·大肠杆菌的质粒DNA转化 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA快速小提 | 第36页 |
| ·pEGFP-c1的转染 | 第36-37页 |
| ·转染效率的检测 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-41页 |
| ·不同DNA浓度对转染效率的影响 | 第37-38页 |
| ·不同脂质体浓度对转染效率的影响 | 第38页 |
| ·DNA/脂质体复合物的暴露时间对转染效率的影响 | 第38-39页 |
| ·不同细胞汇合度对转染效率的影响 | 第39-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 卵母细胞体外成熟及孤雌激活 | 第42-57页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第42-43页 |
| ·溶液的配制 | 第43-45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第45页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-50页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第46-47页 |
| ·不同培养液对卵母细胞体外成熟的影响 | 第46页 |
| ·PFF和FBS对卵母细胞体外成熟的影响 | 第46-47页 |
| ·EGF对卵母细胞体外成熟的影响 | 第47页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第47-50页 |
| ·不同电击参数与激活液对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第47-48页 |
| ·电激活联合化学处理对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第48-49页 |
| ·不同浓度与激活时间的离子霉素对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第49-50页 |
| ·卵龄对体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响 | 第50页 |
| ·猪孤雌胚体外发育形态变化 | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-57页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第50-52页 |
| ·卵母细胞的孤雌激活 | 第52-57页 |
| 第五章 重构胚的构建及体外发育 | 第57-68页 |
| 1 材料与方法 | 第57-61页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第57-59页 |
| ·溶液配制 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第59页 |
| ·供体细胞的准备 | 第59页 |
| ·受体卵母细胞去核 | 第59-60页 |
| ·去核卵母细胞的核移植 | 第60页 |
| ·融合与激活 | 第60页 |
| ·胚胎培养 | 第60-61页 |
| 2 结果 | 第61-64页 |
| ·供体细胞对核移植重构胚发育的影响 | 第61-63页 |
| ·不同供体细胞类型对重构胚体外发育的影响 | 第61页 |
| ·不同代数的胎儿成纤维细胞对重构胚体外发育的影响 | 第61-62页 |
| ·细胞周期同步化处理供体细胞对重构胚体外发育的影响 | 第62-63页 |
| ·不同去核方法对去核率与重构胚体外发育的影响 | 第63页 |
| ·不同胚胎培养基对重构胚体外发育的影响 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-68页 |
| ·供体细胞对核移植重构胚发育的影响 | 第64页 |
| ·不同去核方法对去核率与重构胚后期发育的影响 | 第64-65页 |
| ·不同胚胎培养基对于重构胚体外发育的影响 | 第65-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第76页 |
