| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 文献综述 | 第14-30页 |
| 第一章 A 型流感病毒的反向遗传操作技术及运用 | 第14-30页 |
| ·A 型流感病毒及其基因组特征 | 第14-15页 |
| ·流感病毒的复制 | 第15-18页 |
| ·吸附、穿膜和脱壳 | 第16页 |
| ·基因组的转录与复制 | 第16页 |
| ·病毒蛋白的合成 | 第16-17页 |
| ·病毒粒子的装配 | 第17页 |
| ·病毒的出芽和释放 | 第17-18页 |
| ·流感病毒反向遗传操作技术体系的建立 | 第18-24页 |
| ·流感病毒功能性RNPS 的建立 | 第18-19页 |
| ·以辅助流感病毒为基础的反向遗传操作系统 | 第19-21页 |
| ·完全以克隆的 cDNA 为基础的反向遗传操作系统 | 第21-24页 |
| ·流感病毒反向遗传操作技术的应用 | 第24-28页 |
| ·研究流感病毒基因产物及其对病毒的生活周期与致病性的作用 | 第25-27页 |
| ·用流感病毒作为载体系统表达外源基因 | 第27-28页 |
| ·研制经基因修饰的疫苗候选株 | 第28页 |
| ·结束语 | 第28-30页 |
| 研究内容 | 第30-58页 |
| 第二章 MDV-A 6 个内部骨架基因双向转录/表达重组质粒的构建与验证 | 第30-42页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·病毒、鸡胚、细胞和菌种 | 第31页 |
| ·8 质粒病毒拯救系统 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第32页 |
| ·常用溶液的配置 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-39页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·双向转录表达载体PAD3000 的构建策略及构建 | 第33页 |
| ·转录表达载体的工作原理 | 第33-35页 |
| ·转录/表达载体构建:克隆流感病毒各片段CDNA 到PAD3000 的策略 | 第35页 |
| ·建立流感病毒反向遗传操作技术的路线 | 第35页 |
| ·双向转录表达载体PAD3000 的构建 | 第35-37页 |
| ·MDV-A 6 个内部基因片段重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·6 个内部质粒序列分析 | 第38页 |
| ·质粒的重组 | 第38页 |
| ·共转染 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-40页 |
| ·双向转录表达载体PAD3000 的构建 | 第39页 |
| ·MDV-A 6 个内部基因片段重组质粒的构建及基因分析 | 第39页 |
| ·7+1 病毒拯救 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| 第三章 冷适应减毒的重配A 型流感病毒RMDV-A 的拯救及部分生物学特性的鉴定 | 第42-50页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·细胞、鸡胚和血清 | 第43页 |
| ·8 质粒病毒拯救系统 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·引物合成与设计 | 第43页 |
| ·质粒的提取 | 第43页 |
| ·MDV-A 冷适应株的拯救 | 第43-44页 |
| ·重配病毒RMDV-A 部分生物学特性的鉴定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·MDV-A 冷适应株的拯救 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·电镜观察 | 第45-46页 |
| ·RMDV-A 重配病毒感染MDCK 细胞 | 第46页 |
| ·重配病毒冷适应表型鉴定 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·用8 质粒系统产生冷适应重配流感病毒RMDV-A | 第47-48页 |
| ·提高拯救效率应注意的问题 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 第四章 06～07 A 型流感病毒冷适应疫苗株的拯救 | 第50-58页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·病毒、鸡胚、细胞和菌种 | 第51页 |
| ·8 质粒病毒拯救系统 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-55页 |
| ·用于RNA 操作试剂和器材的DEPC 处理 | 第51-52页 |
| ·引物的设计与合成 | 第52页 |
| ·病毒基因组RNA 的提取 | 第52页 |
| ·反转录（RT）病毒全基因组 | 第52页 |
| ·聚合酶链反应（PCR）扩增病毒HA 和NA 基因 | 第52-53页 |
| ·目的片段的回收 | 第53页 |
| ·目的片段与T 载体的连接 | 第53页 |
| ·连接产物的转化 | 第53页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第53页 |
| ·重组双向转录/表达质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·单一基因片段的功能验证 | 第54页 |
| ·06～07 流感病毒冷适应株的拯救 | 第54页 |
| ·重配病毒RMDV-A-H1、RMDV-A-H3 的初步鉴定 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-57页 |
| ·HA﹑NA 基因RT-PCR | 第55页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第55页 |
| ·7+1 病毒拯救 | 第55-56页 |
| ·RMDV-A-H1、RMDV-A-H3 冷适应株的拯救 | 第56-57页 |
| ·RMDV-A-H1、RMDV-A-H3 RT- PCR 测序鉴定 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57页 |
| ·结论 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录（缩略语） | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 个人简介 | 第72页 |
