| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| ·盐肤木、蚜虫及五倍子的简述 | 第14-17页 |
| ·盐肤木的生物学特性 | 第14-15页 |
| ·盐肤木的研究现状 | 第15-16页 |
| ·五倍子的研究现状 | 第16页 |
| ·角倍蚜的研究现状 | 第16-17页 |
| ·植物防御 | 第17-18页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶概述 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 RcPAL基因的克隆 | 第20-38页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第20-21页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-31页 |
| ·盐肤木总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| ·RcPAL基因的克隆 | 第24-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·盐肤木总RNA的提取及检测 | 第31-32页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| ·RcPAL基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 RcPAL基因的生物信息学分析 | 第38-42页 |
| ·RcPAL基因序列的内含子与外显子分析 | 第38-39页 |
| ·RcPAL基因的多重序列比对 | 第39-41页 |
| ·RcPAL基因的系统发育分析 | 第41-42页 |
| 第四章 RcPAL基因重组表达载体的构建及原核表达 | 第42-60页 |
| ·材料 | 第42-47页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·培养基和常用试剂 | 第43-47页 |
| ·方法 | 第47-54页 |
| ·含有酶切位点的引物设计 | 第47页 |
| ·PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·产物胶回收 | 第48页 |
| ·产物的克隆 | 第48页 |
| ·质粒的提取 | 第48-49页 |
| ·T—PAL重组质粒和表达载体pET-28a双酶切 | 第49页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第49页 |
| ·酶切产物的连接 | 第49-50页 |
| ·连接产物的转化和筛选阳性克隆 | 第50页 |
| ·重组表达载体质粒的提取 | 第50页 |
| ·重组表达载体的转化 | 第50页 |
| ·不同条件诱导RcPAL在大肠杆菌中的表达 | 第50-51页 |
| ·样品制备及SDS-PAGE电泳检测 | 第51页 |
| ·RcPAL基因融合蛋白的大量表达 | 第51页 |
| ·RcPAL基因融合蛋白的亲和层析纯化 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测各纯化样品 | 第52页 |
| ·Western Blotting检测RcPAL基因融合蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·各样品蛋白浓度的测定 | 第53-54页 |
| ·RcPAL的酶活性测定 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·重组载体的构建 | 第54-56页 |
| ·融合蛋白的原核表达 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 RcPAL的酶学性质研究 | 第60-65页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·方法 | 第60页 |
| ·RcPAL最适pH的测定 | 第60页 |
| ·RcPAL最适温度的测定 | 第60页 |
| ·RcPAL动力学参数的测定 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·RcPAL的最适pH | 第60-61页 |
| ·RcPAL的最适温度及活化能(Ea)的计算 | 第61-62页 |
| ·RcPAL动力学曲线与米氏常数(K_m)的测定 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 RcPAL基因的定点突变 | 第65-71页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·培养基及常用试剂 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·定点突变 | 第65-67页 |
| ·突变体RcPAL的酶活性测定 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-70页 |
| ·RcPAL基因的定点突变 | 第67-68页 |
| ·突变体表达蛋白的酶活性测定 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 攻读学位期间取得的硏究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简况及联系方式 | 第77-79页 |
