| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-27页 |
| 1 几丁质研究概况 | 第14-15页 |
| 2 几丁质酶研究概况 | 第15-26页 |
| ·研究历史 | 第16页 |
| ·分布与性质 | 第16-18页 |
| ·国内外研究进展 | 第18-24页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第24-26页 |
| ·在害虫防治中的应用 | 第24-25页 |
| ·处理几丁质废物,保护环境 | 第25页 |
| ·水解壳聚糖制备功能性低聚糖 | 第25-26页 |
| ·制备真菌原生质体作为分子生物学研究工具 | 第26页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第26-27页 |
| 实验部分 | 第27-56页 |
| 第一章 产几丁质酶的嗜麦芽窄食单胞菌的筛选及其16S rDNA序列的研究 | 第27-36页 |
| 1 前言 | 第27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·几丁质的处理 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·各种溶液、缓冲液及其配置方法 | 第28-29页 |
| ·常用溶液 | 第28页 |
| ·常用缓冲液 | 第28-29页 |
| ·抽提质粒用缓冲液 | 第29页 |
| ·DNA分子标准及试剂盒 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·几丁质酶产生菌株的分离 | 第29-30页 |
| ·分离 | 第29-30页 |
| ·纯化与筛选 | 第30页 |
| ·菌种鉴定 | 第30-32页 |
| ·细菌染色体DNA提取 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·电泳分析 | 第31页 |
| ·PCR扩增产物的回收纯化 | 第31-32页 |
| ·16S rDNA克隆载体的构建 | 第32页 |
| 3 试验结果 | 第32-33页 |
| ·分离结果 | 第32-33页 |
| ·分子生物学方法鉴定结果 | 第33页 |
| ·嗜麦芽窄食单胞菌与其他产几丁质酶细菌16S rDNA的遗传关系 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| ·几丁质酶产生菌的分离 | 第33-34页 |
| ·菌株C的鉴定 | 第34-35页 |
| ·嗜麦芽窄食单胞菌与有关产几丁质酶菌的16S rDNA遗传关系 | 第35页 |
| 5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第二章 分离菌株产几丁质酶条件的研究 | 第36-45页 |
| 1 实验材料与方法 | 第36-39页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·发酵培养基 | 第36页 |
| ·各种溶液、缓冲液及其配置方法 | 第36页 |
| ·酶活力的测定方法 | 第36-38页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线的制作 | 第36-38页 |
| ·酶活力测定 | 第38页 |
| ·菌株产酶条件实验 | 第38-39页 |
| ·生长曲线 | 第38页 |
| ·酶活曲线 | 第38页 |
| ·最适碳源的测定 | 第38页 |
| ·最适氮源的测定 | 第38页 |
| ·诱导物质对几丁质酶合成的影响 | 第38页 |
| ·最适pH值的测定 | 第38-39页 |
| ·培养温度对酶合成的影响 | 第39页 |
| ·培养环境条件对酶合成的影响 | 第39页 |
| 2 实验结果 | 第39-42页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线 | 第39-40页 |
| ·生长曲线 | 第40页 |
| ·产酶曲线 | 第40页 |
| ·碳源对酶合成的影响 | 第40页 |
| ·氮源对酶合成的影响 | 第40-41页 |
| ·诱导物质对几丁质酶合成的影响 | 第41页 |
| ·培养基pH值的影响 | 第41页 |
| ·培养温度对酶合成的影响 | 第41页 |
| ·培养环境条件对酶合成的影响 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| ·酶活力测定方法 | 第42页 |
| ·发酵条件的研究 | 第42-44页 |
| ·S.maltophilia的最适碳源 | 第42页 |
| ·S.maltophilia的最适氮源 | 第42-43页 |
| ·诱导物对产酶的影响 | 第43页 |
| ·初始pH值和培养温度对产酶的影响 | 第43-44页 |
| ·培养时间对产酶的影响 | 第44页 |
| ·培养环境对产酶的影响的影响 | 第44页 |
| 4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 嗜麦芽窄食单胞菌几丁质酶的性质和抑菌性的研究 | 第45-50页 |
| 1 实验材料和方法 | 第45-46页 |
| ·试验材料 | 第45页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第45页 |
| ·酶反应的最适温度和酶的热稳定性 | 第45-46页 |
| ·酶反应的最适pH和酶的酸碱稳定性 | 第46页 |
| ·几丁质酶分子量确定 | 第46页 |
| ·抑菌试验步骤 | 第46页 |
| 2 实验结果 | 第46-48页 |
| ·酶反应的最适温度和酶的热稳定性 | 第46-47页 |
| ·酶反应的最适pH值 | 第47页 |
| ·几丁质酶分子量确定 | 第47页 |
| ·抑菌试验结果 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| ·酶学性质的研究 | 第48页 |
| ·几丁质酶最适反应温度和热稳定性 | 第48页 |
| ·几丁质酶最适反应pH值和酸碱稳定性 | 第48页 |
| ·酶分子量的确定 | 第48-49页 |
| ·几丁质酶的抑菌性研究 | 第49页 |
| 4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 几丁质酶基因的克隆与酶蛋白结构的预测 | 第50-56页 |
| 1 实验方法 | 第50-51页 |
| ·聚合酶链反应 | 第50页 |
| ·电泳分析和PCR扩增产物的回收纯化 | 第50-51页 |
| ·几丁质酶克隆载体的构建 | 第51页 |
| 2 实验结果 | 第51-53页 |
| ·核酸同源性分析 | 第51-52页 |
| ·推导出的蛋白质结构功能分析 | 第52-53页 |
| ·蛋白质功能区的预测 | 第52页 |
| ·蛋白质的基本性质分析 | 第52-53页 |
| ·跨膜信号分析 | 第52-53页 |
| ·COILS结构分析 | 第53页 |
| ·Leucine Zipper结构分析 | 第53页 |
| ·空间结构预测 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| ·DNA同源性分析 | 第54页 |
| ·DNA高级结构分析 | 第54页 |
| ·推译的编码蛋白质结构与功能 | 第54-55页 |
| 4 本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-58页 |
| 1 产几丁质酶嗜麦芽窄食单胞菌菌株的分离与其分子生物学鉴定 | 第56页 |
| 2 分离菌株最适产酶条件的确定 | 第56页 |
| 3 分离菌株几丁质酶的性质 | 第56页 |
| 4 分离菌株几丁质酶基因的克隆与分析 | 第56-57页 |
| 5 推译的几丁质酶氨基酸序列分析 | 第57-58页 |
| 研究展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录一 攻硕期间发表论文 | 第67-68页 |
| 附录二 16S rDNA测序结果 | 第68-69页 |
| 附录三 菌株C的chiA基因测序结果 | 第69-70页 |
