| 英文缩写词表 | 第1-10页 |
| 绪论 | 第10-17页 |
| 1 肿瘤浸润转移的生物学基础 | 第10-11页 |
| 2 基质金属蛋白酶 | 第11-13页 |
| 3 金属蛋白酶组织抑制剂 | 第13-15页 |
| 4 TIMPs 与肿瘤侵袭转移的关系 | 第15-17页 |
| 材料和方法 | 第17-32页 |
| 1 主要材料与来源 | 第17-19页 |
| ·主要器材 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·细胞、质粒与菌株 | 第18-19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19页 |
| 2 主要实验方法 | 第19-31页 |
| ·TIMP-3 真核表达载体构建 | 第19-25页 |
| ·寻找TIMP-3 的全长cDNA 序列 | 第19-20页 |
| ·设计TIMP-3 引物和β-actin 引物 | 第20页 |
| ·总RNA 的提取 | 第20页 |
| ·逆转录获得TIMP-3 模板cDNA | 第20-21页 |
| ·PCR 扩增人TIMP-3 cDNA 片段 | 第21页 |
| ·TIMP-3 片断的TA 克隆 | 第21-24页 |
| ·TIMP-3 真核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·TIMP-3 在前列腺癌PC-3M 细胞中的表达 | 第25-28页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·重组质粒转染前列腺癌细胞 | 第25-26页 |
| ·转染细胞的筛选 | 第26页 |
| ·RT-PCR 测定TIMP-3 在PC-3M 细胞中的表达 | 第26-27页 |
| ·Western blot 法测定TIMP-3 在PC-3M 细胞中的表达 | 第27-28页 |
| ·TIMP-3 对前列腺癌PC-3M 细胞株作用的体外实验 | 第28-31页 |
| ·实验分组 | 第28-29页 |
| ·前列腺癌细胞生长曲线测定 | 第29页 |
| ·四唑盐(MTT)比色法测定TIMP-3 对PC-3M 细胞活性的影响 | 第29页 |
| ·细胞贴壁实验 | 第29页 |
| ·细胞迁移实验 | 第29-30页 |
| ·NIH3T3 单层细胞侵袭实验(monolayer invasion assay) | 第30页 |
| ·Transwell 侵袭实验 | 第30-31页 |
| ·吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB 染色)染色 | 第31页 |
| ·流式细胞仪(Flow cytometry FCM)检测细胞周期及凋亡峰 | 第31页 |
| 3 统计分析 | 第31-32页 |
| 实验结果 | 第32-48页 |
| 1 TIMP-3 真核表达载体的构建 | 第32-37页 |
| ·组织总RNA 的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR 进行TIMP-3 基因片段的扩增及纯化 | 第32-33页 |
| ·pMD18-T-TIMP-3 重组质粒的获得 | 第33页 |
| ·真核表达载体重组质粒的获得 | 第33-37页 |
| 2 TIMP-3 在前列腺癌细胞中的表达 | 第37-38页 |
| ·三组细胞RNA 的提取 | 第37页 |
| ·半定量RT-PCR 细胞mRNA 中TIMP-3 含量的变化 | 第37-38页 |
| ·Western blot 法测定三组细胞TIMP-3 的表达 | 第38页 |
| 3 TIMP-3 对前列腺癌PC-3M 细胞株作用的体外实验结果 | 第38-48页 |
| ·前列腺癌细胞生长曲线 | 第38-39页 |
| ·MTT 比色法测定三组细胞的细胞活性 | 第39页 |
| ·贴壁实验 | 第39-40页 |
| ·细胞迁移实验 | 第40-42页 |
| ·NIH3T3 单层细胞侵袭实验(monolayer invasion assay) | 第42-44页 |
| ·Transwell 侵袭实验 | 第44-45页 |
| ·吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB 染色)染色 | 第45-46页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期及凋亡峰 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-53页 |
| 1 pcDNA-TIMP-3 真核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 2 TIMP-3 在前列腺癌PC-3M 细胞中的表达 | 第49-50页 |
| 3 TIMP-3 对前列腺癌PC-3M 细胞侵袭能力的影响 | 第50-52页 |
| 4 TIMP-3 对前列腺癌PC-3M 细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 中文摘要 | 第59-64页 |
| Abstract | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
