| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1 S100蛋白的分类及分布 | 第11-12页 |
| 2 S100A12基因,mRNA和蛋白质结构及离子结合特性 | 第12-14页 |
| 3 S100A12与晚期糖基化终末产物受体的关系 | 第14-15页 |
| 4 S100A12组织及亚细胞定位 | 第15页 |
| 5 S100A12在不同疾病与组织中的表达 | 第15-16页 |
| 6 展望 | 第16-17页 |
| 第二章 奶牛S100A12基因克隆及其在乳腺和生殖系统中的表达 | 第17-30页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| ·实验动物及样品采集 | 第17-18页 |
| ·菌株与克隆载体 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要溶液的配制 | 第18-19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第18-19页 |
| ·培养细菌所用溶液 | 第19页 |
| ·主要仪器与设备 | 第19页 |
| 2 试验方法 | 第19-23页 |
| ·引物设计与合成 | 第19页 |
| ·中国荷斯坦奶牛外周血总RNA的抽提 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR扩增S100A12基因 | 第20页 |
| ·扩增产物的回收和纯化 | 第20-21页 |
| ·S100A12基因的连接转化与鉴定 | 第21-23页 |
| ·连接及转化 | 第21页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第21-22页 |
| ·S100A12基因序列测定及序列分析 | 第22-23页 |
| ·S100A12在奶牛乳腺和生殖系统中的表达分析 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-27页 |
| ·奶牛S100A12基因的RT-PCR扩增 | 第23页 |
| ·重组质粒的酶切和PCR鉴定 | 第23-24页 |
| ·DNA序列分析 | 第24-26页 |
| ·S100A12在奶牛乳腺和生殖器官中的表达 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-30页 |
| 第三章 奶牛S100A12基因原核表达、蛋白纯化及抗菌活性研究 | 第30-47页 |
| 1 实验材料 | 第30-33页 |
| ·菌株和载体 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关溶液 | 第32页 |
| ·Western-blotting相关溶液 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-37页 |
| ·重组质粒pCold TF-S100A12的构建流程 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒pMD19-T-S100A12及表达质粒pCold TF的提取、酶切与回收 | 第33-34页 |
| ·连接与转化 | 第34页 |
| ·重组阳性转化子的鉴定 | 第34页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第34-36页 |
| ·重组蛋白在宿主菌中的分布 | 第34-35页 |
| ·诱导温度优化 | 第35页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第35页 |
| ·诱导时间的优化 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·Western-blotting检测 | 第36页 |
| ·纯化的目的蛋白含量测定 | 第36页 |
| ·S100A12的活性检测 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-44页 |
| ·重组表达质粒pCold TF-S100A12的鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第38-41页 |
| ·重组蛋白在宿主菌中的分布 | 第38-39页 |
| ·诱导温度优化 | 第39页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第39-40页 |
| ·诱导时间的优化 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·Western blotting检测 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第42-43页 |
| ·S100A12重组蛋白普通LB平板上的活性测定 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| ·外源基因的融合表达 | 第44页 |
| ·诱导表达及诱导条件的优化 | 第44-45页 |
| ·S100A12重组蛋白的抗菌活性 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
