| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| ·氨基糖苷类抗生素 | 第10-12页 |
| ·氨基糖苷类抗生素的概述 | 第10-11页 |
| ·氨基糖苷类抗生素的作用机制 | 第11-12页 |
| ·氨基糖苷类抗生素钝化酶 | 第12-15页 |
| ·氨基糖苷类抗生素钝化酶的作用机制 | 第12-13页 |
| ·氨基糖苷类抗生素钝化酶的临床分布 | 第13-14页 |
| ·本课题研究的氨基糖苷双功能酶AAC(6’)-APH(2”) | 第14-15页 |
| ·寻找氨基糖苷类抗生素钝化酶AAC(6’)-APH(2”)抑制剂的研究进展 | 第15-16页 |
| ·根据修饰酶活性位点带电特性设计的抑制肽 | 第15页 |
| ·根据活性靶点设计的抑制剂 | 第15页 |
| ·根据酶结构相似性设计的抑制剂 | 第15-16页 |
| ·根据已有抗生素结构进行改造的抑制剂 | 第16页 |
| ·立题依据 | 第16-18页 |
| 第二章 氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6’)-APH(2”)的克隆、表达、纯化及性质研究 | 第18-42页 |
| ·材料与仪器 | 第18-21页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·质粒 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·主要溶剂和缓冲液 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·培养基成分 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-31页 |
| ·菌种的培养与保藏 | 第21页 |
| ·细菌总DNA 的制备 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌质粒转化 | 第22页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第22页 |
| ·aac(6’)-aph(2’’)耐药基因的检测 | 第22-23页 |
| ·aac(6’)-aph(2’’)基因的表达引物设计 | 第23页 |
| ·aac(6’)-aph(2’’)基因的PCR 反应扩增 | 第23-24页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第24页 |
| ·aac(2’)-aph(2’’)PCR 产物的克隆 | 第24-25页 |
| ·表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·转化子蛋白的试表达 | 第26页 |
| ·转化子蛋白表达诱导条件的摸索 | 第26-28页 |
| ·AAC(6’)-APH(2”)的表达与纯化 | 第28页 |
| ·目标蛋白的鉴定 | 第28-29页 |
| ·蛋白质浓度的检测 | 第29页 |
| ·AAC(6’)-APH(2”)的催化活性检测 | 第29页 |
| ·AAC(6’)-APH(2”)对于卡那霉素的米氏常数的测定 | 第29-31页 |
| ·质谱检测 | 第31页 |
| ·分析软件 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-41页 |
| ·aac(6’)-aph(2’’)基因的检测 | 第31-32页 |
| ·aac(2’)-aph(2’’)基因的PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·aac(6’)-aph(2’’)PCR 产物的克隆 | 第33页 |
| ·aac(6’)-aph(2’’)基因序列和其对应氨基酸序列分析 | 第33-35页 |
| ·AAC(6’)-APH(2’’)的表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·转化子蛋白的试表达 | 第36-37页 |
| ·转化子蛋白表达诱导条件的摸索 | 第37-38页 |
| ·AAC(6’)-APH(2’’)的纯化及蛋白浓度检测 | 第38-39页 |
| ·AAC(6’)-APH(2”)的体外催化活性的抑菌圈法检测 | 第39页 |
| ·AAC(6’)-APH(2”)的体外催化活性的质谱检测 | 第39-40页 |
| ·AAC(6’)-APH(2”)对于卡那霉素B 的米氏常数的测定 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 AAC(6’)-APH(2’’)抑制剂筛选模型的建立及筛选 | 第42-54页 |
| ·材料与仪器 | 第42页 |
| ·菌种 | 第42页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·菌种的培养与保藏 | 第42页 |
| ·AAC(6’)-APH(2’’)抑制剂筛选模型的建立 | 第42-46页 |
| ·AAC(6’)-APH(2’’)抑制剂的筛选 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·筛选模型的建立 | 第46-50页 |
| ·样品筛选 | 第50-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 附录 | 第59-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
| 代表性学术论文目录 | 第65-66页 |
| 附件 | 第66页 |
