| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-17页 |
| 符号说明 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-21页 |
| 第一部分 人同源盒基因NKX3.1启动子的克隆及活性测定 | 第21-50页 |
| 材料 | 第21-22页 |
| 试剂 | 第21-22页 |
| 主要仪器 | 第22页 |
| 方法 | 第22-33页 |
| 人基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| NKX3.1基因5’上游1040bp启动子片段的PCR扩增及纯化 | 第23-24页 |
| 1040bp启动子片段的T-载体亚克隆 | 第24-26页 |
| 荧光素酶报道基因载体-NKX3.1启动子质粒的构建 | 第26-28页 |
| 绿色荧光蛋白报道基因-NKX3.1启动子质粒的构建 | 第28-31页 |
| 细胞的培养和转染实验 | 第31-32页 |
| 荧光素酶活性测定 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33-46页 |
| PCR扩增NKX3.1基因5’上游1040bp启动子片段及其T克隆鉴定 | 第33-34页 |
| pGL_3-1040bp启动子质粒的鉴定及测序 | 第34-36页 |
| pGL_3-1040bp启动子转染LNCaP细胞及双荧光素酶活性测定 | 第36-37页 |
| 雄激素类似物R1881对pGL_3-1040bp启动子活性的影响 | 第37-38页 |
| pGL_3-1040bp启动子转染不同肿瘤细胞系及其启动子活性测定 | 第38页 |
| pEGFP-1040bp启动子转染不同肿瘤细胞系及绿色荧光蛋白的表达 | 第38-46页 |
| 计算机转录因子数据库TRANSFAC分析 | 第46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 第一部分总结 | 第49-50页 |
| 第二部分 NKX3.1基因启动子上游调控区域的鉴定 | 第50-76页 |
| 材料 | 第50-51页 |
| 试剂 | 第50页 |
| 主要仪器 | 第50-51页 |
| 方法 | 第51-56页 |
| 荧光素酶报道基因-1040bp启动子缺失突变体的构建 | 第51-54页 |
| 细胞培养和转染实验 | 第54-55页 |
| 双荧光素酶活性测定 | 第55-56页 |
| 结果 | 第56-75页 |
| 1040bp启动子缺失突变体的酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 缺失突变体的启动子活性测定 | 第57-59页 |
| 30bp负调控区在不同肿瘤细胞系中的活性 | 第59页 |
| 1040bp启动子缺失突变体的测序结果 | 第59-75页 |
| 讨论 | 第75页 |
| 第二部分总结 | 第75-76页 |
| 第三部分 NKX3.1启动子上游负调控区及其结合蛋白的鉴定 | 第76-109页 |
| 材料 | 第76-77页 |
| 试剂 | 第76-77页 |
| 主要仪器 | 第77页 |
| 方法 | 第77-93页 |
| pGL3-399置换突变体的构建 | 第77-81页 |
| 30bp负调控区-异源启动子-荧光素酶报道基因质粒的构建 | 第81-83页 |
| 20bp负调控序列内缺失质粒的构建 | 第83-86页 |
| 细胞培养和转染实验 | 第86-87页 |
| 荧光素酶活性测定 | 第87页 |
| 核蛋白的制备 | 第87-88页 |
| 电泳迁移率变动分析 | 第88-93页 |
| 结果 | 第93-105页 |
| pGL_3-399置换突变体酶切鉴定及测序 | 第93-96页 |
| 30bp负调控区置换突变对启动子活性的影响 | 第96-97页 |
| 30bp负调控序列对异源启动子活性的影响 | 第97-98页 |
| 计算机数据库TRANSFAC分析 | 第98-99页 |
| EMSA鉴定30bp-负调控序列的特异结合蛋白 | 第99-104页 |
| 20bp-负调控序列内缺失对NKX3.1启动子活性的影响 | 第104-105页 |
| 负调控序列陷阱DNA对NKX3.1启动子活性的影响 | 第105页 |
| 讨论 | 第105-108页 |
| 第三部分总结 | 第108-109页 |
| 第四部分 未来研究工作的展望 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 博士在读期间发表的论文目录 | 第115页 |
