| 致谢 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-38页 |
| 第一章 蛋白质组的研究与酵母双杂交技术 | 第13-18页 |
| 1.蛋白质组的研究 | 第13-16页 |
| ·蛋白质组学研究的主要领域 | 第13-15页 |
| ·蛋白质组学研究技术 | 第15-16页 |
| 2.酵母双杂技术综述 | 第16-18页 |
| ·酵母双杂技术 | 第16页 |
| ·酵母双杂技术在蛋白质互作研究中的应用 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂技术所用的主要质粒与菌种 | 第17-18页 |
| 第二章 分子生物学研究的模式植物拟南芥及若干基因的研究现状 | 第18-26页 |
| 1.拟南芥的研究现状 | 第18-21页 |
| ·研究历史 | 第18-19页 |
| ·研究现状 | 第19-20页 |
| ·拟南芥中与逆境(温度、水分、盐分)有关基因研究现状 | 第20-21页 |
| 2.拟南芥基因AtCHIP作为E3连接酶的结构与功能研究 | 第21-24页 |
| ·动物中同源基因CHIP的研究 | 第22-23页 |
| ·植物基因AtCHIP的研究现状 | 第23-24页 |
| 3.叶绿体蛋白酶基因的研究现状 | 第24-26页 |
| ·主要蛋白酶基因 | 第24-25页 |
| ·叶绿体中蛋白酶的分布示意图 | 第25-26页 |
| 第三章 泛素-蛋白酶体系及蛋白质调控 | 第26-28页 |
| 1.泛素-蛋白酶体系 | 第26-27页 |
| ·泛素 | 第26页 |
| ·泛素-蛋白酶体系中的主要酶(体) | 第26-27页 |
| ·蛋白酶体(proteasome) | 第27页 |
| 2.泛素-蛋白酶体系与蛋白质降解 | 第27-28页 |
| 第四章 桑树遗传和生物工程的研究与应用进展 | 第28-38页 |
| 1.桑树的遗传资源及其利用 | 第28-32页 |
| ·桑树种质资源及遗传育种 | 第28-30页 |
| ·细胞工程及在桑树育种中的应用 | 第30-32页 |
| 2.桑树的基因工程 | 第32-35页 |
| ·供转化的基因 | 第32页 |
| ·转化途径 | 第32-33页 |
| ·桑树转基因研究现状与进展 | 第33-34页 |
| ·桑树转基因技术存在的问题 | 第34-35页 |
| 3.桑树基因的分离和利用现状 | 第35-38页 |
| ·植物基因克隆技术 | 第35-36页 |
| ·桑树等木本植物分子标记和基因克隆 | 第36-38页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第38-50页 |
| 第五章 材料与方法 | 第38-50页 |
| 1.材料 | 第38-39页 |
| ·植物材料及处理 | 第38页 |
| ·主要质粒与酵母菌菌种 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌质粒与菌株 | 第39页 |
| 2.方法 | 第39-48页 |
| ·质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·拟南芥cDNA文库的滴定 | 第40页 |
| ·酵母菌感受态细胞的制备，转化及质粒DNA的提取，纯化 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备，转化及质粒DNA的提取，纯化 | 第41-42页 |
| ·AtCHIP互作基因(猎物基因)的筛选 | 第42页 |
| ·酵母菌双杂技术中假阳性克隆的排除 | 第42页 |
| ·AtCHIP互作基因DNA序列结果分析 | 第42-43页 |
| ·PET系统及质粒的构建，蛋白质的表达和提取 | 第43-44页 |
| ·PET系统表达蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·体外泛素—蛋白质结合试验和检测 | 第45页 |
| ·AtCHIP转基因植株逆境下若干互作蛋白和相关蛋白质的的消长 | 第45页 |
| ·用基因过量表达，反义技术研究AtCHIP互作基因ClpP4的功能 | 第45-46页 |
| ·用基因过量表达，反义技术研究AtCHIP互作基因的功能 | 第46页 |
| ·桑树基因AtNHX1的克隆及拟南芥的转化 | 第46-48页 |
| 3.研究思路与技术路线 | 第48-50页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第50-81页 |
| 第六章 酵母双杂技术研究拟南芥基因AtCHIP的蛋白质互作基因 | 第50-55页 |
| 1.拟南芥cDNA文库滴定 | 第50-51页 |
| ·滴定结果 | 第50页 |
| ·候选阳性克隆的初次筛选 | 第50-51页 |
| 2.阳性“猎物”克隆的筛选 | 第51-52页 |
| ·酵母菌质粒DNA转化大肠杆菌KC8 | 第51页 |
| ·KC8质粒DNA的提取，转化 | 第51-52页 |
| 3.假阳性克隆的排除 | 第52-53页 |
| ·回转试验结果 | 第52页 |
| ·β-半乳糖培养基筛选 | 第52-53页 |
| 4.阳性克隆DNA测序及分析 | 第53-55页 |
| ·供测序的阳性克隆DNA | 第53页 |
| ·测序结果与拟南芥Genebank分析 | 第53-55页 |
| 第七章 AtCHIP若干互作基因的蛋白质表达及体外泛素—蛋白质结合试验 | 第55-59页 |
| 1.蛋白质表达质粒构建，大肠杆菌BL21转化 | 第55页 |
| 2.目标蛋白的诱导，提取，纯化 | 第55-57页 |
| 3.AtCHIP作E3连接酶的泛素化作用及测验 | 第57-58页 |
| 4.AtCHIP在逆境胁迫下蛋白互作中的位置分析 | 第58-59页 |
| 第八章 AtCHIP转基因植株逆境下若干互作蛋白的消长 | 第59-64页 |
| 1.AtCHIP过量表达植株正常条件下Clp的蛋白质 | 第59页 |
| 2.AtCHIP过量表达植株低温处理下Clp的蛋白质 | 第59-60页 |
| 3.AtCHIP过量表达植株高温处理下Clp的蛋白质 | 第60页 |
| 4.AtCHIP若干互作基因在植物光合修复中的作用 | 第60-64页 |
| ·植物光损伤后的酶修复体系 | 第60-61页 |
| ·AtCHIP过量表达植株强光处理下的表型及Clp、Deg和FtsH的蛋白质 | 第61-63页 |
| ·AtCHIP过量表达植株强光处理下D1蛋白质与AtCHIP的调控 | 第63-64页 |
| 第九章 AtCHIP互作基因ClpP4的功能研究 | 第64-70页 |
| 1.ClpP4基因敲除植株的鉴定 | 第64-66页 |
| 2.ClpP4基因敲除后植株的表型 | 第66-67页 |
| 3.ClpP4基因过量表达及反义转基因植株的鉴定 | 第67-69页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·转基因植株的Northern Blot鉴定 | 第68-69页 |
| ·转基因植株的Western Blot鉴定 | 第69页 |
| 4.ClpP4基因过量表达及反义转基因植株的表型 | 第69-70页 |
| 第十章 桑树(Morus alba Linne)基因mNHX1的克隆及其功能研究 | 第70-75页 |
| 1.桑树基因NHX1的克隆 | 第70-71页 |
| ·RT-PCR法合成桑芽cDNA | 第70-71页 |
| ·PCR扩增桑芽基因mNHX1 cDNA | 第71页 |
| ·mNHX1的克隆、鉴定 | 第71页 |
| 2.桑树基因mNHX1转拟南芥植株的鉴定 | 第71-72页 |
| ·转基因植株纯系 | 第71页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第71-72页 |
| 3.拟南芥转基因植株的表型 | 第72-75页 |
| ·盐浓度与转基因种子发芽率 | 第72-74页 |
| ·盐浓度与转基因植株的生长 | 第74-75页 |
| 第十一章 讨论与结论 | 第75-81页 |
| 1.讨论 | 第75-79页 |
| ·酵母菌双杂技术的实践与应用 | 第75页 |
| ·翻译后蛋白调控 | 第75-76页 |
| ·AtCHIP互作蛋白UBQ1、UBQ5—泛素因子 | 第76页 |
| ·AtCHIP互作蛋白UBC8、UBC9和UBC10—泛素缀合酶蛋白E2 | 第76页 |
| ·AtCHIP互作蛋白ATP依赖性Clp蛋白酶，FtSH蛋白酶 | 第76-77页 |
| ·AtCHIP是蛋白分解系统原核生物向真核生物发展的一个实例 | 第77-79页 |
| 2.结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 英文摘要 | 第93-97页 |
| 附录 | 第97-105页 |
| 附录1.试剂、缓冲液和培养基的配制及主要仪器设备 | 第97-102页 |
| 附录2.主要质粒构图 | 第102-105页 |
| 附录3.博士期间形成的主要学术论文目录 | 第105页 |
