| 1 引言 | 第1-11页 |
| 2 材料与方法 | 第11-28页 |
| ·材料 | 第11-13页 |
| ·试验材料 | 第11页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第11页 |
| ·菌株与载体 | 第11页 |
| ·所用主要仪器 | 第11-12页 |
| ·仪器与药品预处理 | 第12-13页 |
| ·玻璃制品、塑料制品和电泳槽 | 第12页 |
| ·试剂及处理 | 第12-13页 |
| ·试验方法 | 第13-28页 |
| ·梨果组织总RNA提取与质量检测 | 第13-17页 |
| ·改良异硫氰酸胍法 | 第13-14页 |
| ·热硼酸法 | 第14-15页 |
| ·改良CTAB法 | 第15-16页 |
| ·Qiagen Rneasy植物试剂盒 | 第16-17页 |
| ·总RNA质量检测 | 第17页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第17-19页 |
| ·cDNA的合成 | 第19-21页 |
| ·RNA样品的预处理 | 第19页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第19-20页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第20页 |
| ·末端平滑化 | 第20页 |
| ·合成cDNA的纯化精制 | 第20-21页 |
| ·用SPIN-400Column按以下步骤对cDNA按大小进行分级分离 | 第21-22页 |
| ·cDNA文库构建 | 第22-25页 |
| ·cDNA的载体连接 | 第22-24页 |
| ·准备宿主菌 | 第24页 |
| ·用Gigapack Gold Ⅲ Packing Extract包装连接产物 | 第24-25页 |
| ·铺平板和滴度的测定 | 第25页 |
| ·cDNA文库的鉴定 | 第25-28页 |
| ·用PCR方法鉴定文库cDNA片段大小 | 第25-26页 |
| ·初级cDNA文库的扩增 | 第26-27页 |
| ·扩增文库滴度的测定 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-33页 |
| ·四种总RNA提取方法的比较 | 第28-29页 |
| ·总RNA的完整性检测 | 第28页 |
| ·总RNA的纯度和产率评价 | 第28-29页 |
| ·MRNA的质量分析 | 第29页 |
| ·双链cDNA鉴定 | 第29-30页 |
| ·cDNA文库的质量分析 | 第30-33页 |
| ·cDNA文库滴度测定 | 第30页 |
| ·cDNA文库插入片断的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·扩增cDNA文库的滴度、重组率分析 | 第31-32页 |
| ·cDNA文库的代表性 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-38页 |
| ·cDNA文库构建材料的选择 | 第33页 |
| ·几种方法提取梨果RNA方法的比较 | 第33-34页 |
| ·MRNA的分离 | 第34-35页 |
| ·cDNA合成引物选择与分级分离 | 第35-36页 |
| ·克隆载体的选择 | 第36页 |
| ·cDNA文库的质量 | 第36-37页 |
| ·cDNA文库构建后续工作展望 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 6 参考文献 | 第39-42页 |
| 7 在读期间发表文章 | 第42-50页 |
| 8 作者简历 | 第50-51页 |
| 9 致谢 | 第51页 |