| 第一部分 文献综述 | 第1-80页 |
| 第一章 腺病毒和腺病毒载体 | 第15-37页 |
| ·腺病毒 | 第15-26页 |
| ·腺病毒的生物学特性 | 第15-16页 |
| ·腺病毒基因及其转录表达调控 | 第16-26页 |
| ·腺病毒载体 | 第26-37页 |
| ·腺病毒载体的优点 | 第26-27页 |
| ·非复制型腺病毒载体 | 第27-30页 |
| ·溶瘤型腺病毒载体 | 第30-34页 |
| ·腺病毒载体在临床治疗中的应用 | 第34-37页 |
| 第二章 细胞凋亡 | 第37-71页 |
| ·细胞凋亡概述 | 第37-41页 |
| ·细胞凋亡的概念 | 第37-38页 |
| ·细胞凋亡的生物学意义 | 第38页 |
| ·细胞凋亡(apoptosis)与细胞坏死(necrosis) | 第38-40页 |
| ·细胞凋亡与程序性细胞死亡 | 第40-41页 |
| ·细胞凋亡的诱导因素 | 第41页 |
| ·哺乳动物细胞凋亡的信号转导途径 | 第41-53页 |
| ·细胞凋亡信号传导途径的概念 | 第41-42页 |
| ·哺乳动物细胞凋亡的三条信号传导途径 | 第42-50页 |
| ·细胞凋亡信号传导途径的网络调控 | 第50-53页 |
| ·TRAIL与细胞凋亡 | 第53-65页 |
| ·TRAIL及其基因 | 第54-55页 |
| ·TRAIL受体 | 第55-57页 |
| ·TRAIL及其受体介导的信号转导途径 | 第57-61页 |
| ·TRAIL及其受体与细胞凋亡的调控 | 第61-62页 |
| ·TRAIL在肿瘤基因治疗中的应用 | 第62-65页 |
| ·肿瘤与细胞凋亡 | 第65-71页 |
| ·肿瘤的发生机制 | 第65-66页 |
| ·基于细胞凋亡的肿瘤基因治疗 | 第66-71页 |
| 第三章 病毒感染与细胞凋亡 | 第71-80页 |
| ·病毒感染对细胞凋亡的调控机制 | 第71-78页 |
| ·病毒感染诱导细胞凋亡 | 第71-72页 |
| ·病毒编码的细胞凋亡抑制蛋白 | 第72-74页 |
| ·病毒感染抑制细胞凋亡的分子机制 | 第74-77页 |
| ·病毒抑制细胞凋亡的生物学意义 | 第77-78页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第78-80页 |
| ·本研究的目的 | 第78-79页 |
| ·本研究的意义 | 第79-80页 |
| 第二部分 研究工作 | 第80-158页 |
| 第一章 几种重组腺病毒的构建 | 第80-108页 |
| ·引言 | 第80-82页 |
| ·材料与方法 | 第82-96页 |
| ·菌株、细胞及试剂 | 第82页 |
| ·目的基因、质粒和引物 | 第82-83页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第83-85页 |
| ·DNA片段回收 | 第85-86页 |
| ·酶切与连接 | 第86-87页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第87页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第87-88页 |
| ·菌种的保存 | 第88页 |
| ·菌落PCR | 第88-89页 |
| ·细胞培养基的配制(以DMEM为例) | 第89页 |
| ·细胞传代培养 | 第89-90页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第90页 |
| ·脂质体介导的真核细胞转染 | 第90-91页 |
| ·应用AdEasy系统构建重组腺病毒 | 第91-93页 |
| ·病毒的大量制备与纯化 | 第93-94页 |
| ·纯化病毒的电镜观察 | 第94页 |
| ·重组病毒滴度测定 | 第94-95页 |
| ·重组病毒感染效率测定 | 第95页 |
| ·抽提病毒DNA(QIAamp DNA Blood Mini Kit) | 第95页 |
| ·Western blot分析 | 第95-96页 |
| ·研究结果 | 第96-105页 |
| ·穿梭质粒的构建和鉴定 | 第96-99页 |
| ·同源重组构建重组腺病毒质粒载体 | 第99-102页 |
| ·重组病毒的包装 | 第102-103页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第103-105页 |
| ·重组腺病毒感染效率的测定 | 第105页 |
| ·讨论 | 第105-108页 |
| 第二章 腺病毒E1A增强TRAIL诱导的细胞凋亡 | 第108-121页 |
| ·引言 | 第108-109页 |
| ·材料与方法 | 第109-111页 |
| ·质粒、细胞、病毒及试剂 | 第109-110页 |
| ·光学显微镜观察 | 第110页 |
| ·MTT检测细胞的存活 | 第110页 |
| ·Hoechst 33258染色 | 第110-111页 |
| ·Hoechst 33258／propidium iodide(HO／PI)双染检测凋亡 | 第111页 |
| ·流式细胞术检测DNA亚二倍体峰 | 第111页 |
| ·统计学分析 | 第111页 |
| ·研究结果 | 第111-118页 |
| ·不同来源的细胞对TRAIL的敏感性 | 第111-112页 |
| ·腺病毒E1A的表达增强TRAIL诱导的HeLa细胞凋亡 | 第112-114页 |
| ·E1A克服肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的抗性 | 第114-116页 |
| ·腺病毒E1A增强正常细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性 | 第116-118页 |
| ·讨论 | 第118-121页 |
| 第三章 腺病毒E1A增强TRAIL诱导细胞凋亡的分子机理 | 第121-133页 |
| ·引言 | 第121-122页 |
| ·材料与方法 | 第122-126页 |
| ·质粒、细胞、病毒及试剂(盒) | 第122-123页 |
| ·半定量RT-PCR | 第123-124页 |
| ·Western blot分析 | 第124-125页 |
| ·细胞表面蛋白的流式细胞仪定量检测 | 第125-126页 |
| ·研究结果 | 第126-130页 |
| ·E1A对内源性TRAIL和TRAIL受体mRNA转录的调控 | 第126-127页 |
| ·E1A上调细胞表面DR5的表达 | 第127-128页 |
| ·E1A上调外源性TRAIL的表达 | 第128-130页 |
| ·讨论 | 第130-133页 |
| 第四章 E1A增强TRAIL诱导细胞凋亡的信号通路 | 第133-143页 |
| ·引言 | 第133-135页 |
| ·材料与方法 | 第135-136页 |
| ·菌株、细胞、病毒、抗体与试剂 | 第135页 |
| ·FADDD-DN的扩增与克隆 | 第135页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第135-136页 |
| ·Western blotting分析 | 第136页 |
| ·研究结果 | 第136-140页 |
| ·负显性突变体(FADD-DN)的构建和鉴定 | 第136-137页 |
| ·FADD和CASPASE 8参与了E1A／TRAIL介导的细胞凋亡信号途径 | 第137-138页 |
| ·caspase 9不影响E1A增强TRAIL诱导的P-HLF细胞凋亡 | 第138-140页 |
| ·讨论 | 第140-143页 |
| 第五章 腺病毒E1B19K、E3区基因的表达对E1A增强TRAIL诱导凋亡的抑制作用 | 第143-158页 |
| ·引言 | 第143-145页 |
| ·材料与方法 | 第145-147页 |
| ·菌株、质粒、细胞、病毒及试剂 | 第145页 |
| ·穿梭载体的构建 | 第145页 |
| ·重组病毒的产生 | 第145-146页 |
| ·Southern Blotting分析 | 第146-147页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第147页 |
| ·半定量RT-PCR | 第147页 |
| ·Western Blot | 第147页 |
| ·流式细胞仪检测细胞表面蛋白 | 第147页 |
| ·研究结果 | 第147-155页 |
| ·重组病毒r3／Ad的构建 | 第147-148页 |
| ·CPE和GFP表达检测 | 第148-149页 |
| ·Southern Blotting分析重组病毒基因组 | 第149-150页 |
| ·重组病毒r3／Ad和野生型腺病毒复制能力的比较 | 第150-151页 |
| ·r3／Ad抑制E1A增强TRAIL诱导P-HLF细胞的凋亡 | 第151-152页 |
| ·r3／Ad抑制E1A上调的TRAIL和DR5的表达 | 第152-154页 |
| ·腺病毒E1A、E1B19K、E3基因表达产物调控TRAIL诱导的细胞凋亡途径的推测 | 第154-155页 |
| ·讨论 | 第155-158页 |
| 研究总结 | 第158-159页 |
| 参考文献 | 第159-174页 |
| 博士期间发表和待发表的文章 | 第174-175页 |
| 致谢 | 第175页 |
