| 1 Introduction | 第1-17页 |
| 2 Materials and Methods | 第17-30页 |
| ·DNA isolation and purification | 第17-20页 |
| ·Plasmid DNA Isolation | 第17-18页 |
| ·Plant total DNA isolation | 第18-19页 |
| ·DNA purification | 第19-20页 |
| ·RNA isolation | 第20-21页 |
| ·Plant total RNA extraction | 第20-21页 |
| ·DNA cloning | 第21-23页 |
| ·DNA ligation and purification | 第21页 |
| ·DNA transformation of bacteria (E. coli) | 第21-23页 |
| ·PCR amplification | 第23-24页 |
| ·Molecular hybridisation | 第24-28页 |
| ·Preparation of DNA probes for hybridisation | 第24-25页 |
| ·Southern blotting | 第25-26页 |
| ·Northern blotting | 第26-28页 |
| ·Tobacco Plant Transformation and regeneration | 第28-30页 |
| ·Preparation of transformation explants | 第28-29页 |
| ·Preparation of Transformed Agrobacterium tumefaciens | 第29页 |
| ·Agrobacterium-Mediated Gene Transformation | 第29页 |
| ·Selection of Transgenic Calli | 第29-30页 |
| 3 Results | 第30-36页 |
| ·Construction of tobacco transformation vector | 第30-32页 |
| ·PCR Cloning of bacterial rpoD gene | 第30-31页 |
| ·Addition of petunia RBCS chloroplast targeting sequence to the N-terminus of rpoD gene | 第31-32页 |
| ·Construction of pBCRBCSSigma for tobacco transformation | 第32页 |
| ·Tobacco transformation by agrobacterial LBA4404 | 第32-33页 |
| ·Identification of rpoD transgenic plants by PCR and Southern hybridization | 第33-35页 |
| ·Transgene screening by PCR amplification | 第33-34页 |
| ·Transgenic confirmation by Southern Blotting | 第34-35页 |
| ·Transgene and endogenous genes expression analysis by Northern Blotting | 第35-36页 |
| 4. Discussion | 第36-41页 |
| ·Effects of transgene insertions on their expression levels | 第36-37页 |
| ·Evolutionay conservation of bacterial rpoD gene and plants primary sigma factor (Sig2) | 第37-38页 |
| ·Effects of endogenous plastid genes by rpoD gene | 第38-41页 |
| 5. Conclusion | 第41-43页 |
| Reference | 第43-49页 |
| Abstract | 第49-50页 |
