农杆菌介导获得可去除选择标记的转CpTI抗虫基因玉米植株
| 摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一部分 文献综述 | 第7-28页 |
| 1 植物抗虫基因工程研究现状 | 第8-23页 |
| ·抗虫基因 | 第8-12页 |
| ·标记基因 | 第12页 |
| ·问题与对策 | 第12-23页 |
| ·昆虫产生抗性 | 第12页 |
| ·转基因表达水平低 | 第12-15页 |
| ·转基因沉默 | 第15-18页 |
| ·转基因沉默的机理 | 第15-17页 |
| ·MARs在转基因中的应用 | 第17-18页 |
| ·转基因植物的安全性 | 第18-23页 |
| ·抗性标记基因的剔除技术 | 第18-22页 |
| ·安全性标记基因 | 第22-23页 |
| 2 玉米遗传转化再生体系的建立 | 第23-27页 |
| ·受体系统 | 第23页 |
| ·转化方法 | 第23-25页 |
| ·再生植株的检测 | 第25-27页 |
| ·DNA水平的检测 | 第25-26页 |
| ·转录水平的检测 | 第26页 |
| ·表达水平的检测 | 第26-27页 |
| 3 目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第28-36页 |
| 1 实验材料 | 第28-29页 |
| ·玉米材料 | 第28页 |
| ·农杆菌菌株与质粒载体 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-36页 |
| ·玉米受体材料的制备 | 第29页 |
| ·工程菌株的制备 | 第29-31页 |
| ·质粒载体的构建 | 第29-30页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第30-31页 |
| ·玉米愈伤组织的转化 | 第31页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选、分化与生根壮苗 | 第31页 |
| ·炼苗与移栽 | 第31页 |
| ·转基因植株的检测 | 第31-36页 |
| ·再生植株总DNA的提取、纯化与保存 | 第31-32页 |
| ·DNA提取重要溶液配制 | 第32页 |
| ·PCR检测 | 第32-33页 |
| ·引物 | 第32页 |
| ·PCR仪器、方法、扩增体系与扩增程 | 第32-33页 |
| ·PCR-Dot blotting检测 | 第33页 |
| ·PCR-Southern检测 | 第33-35页 |
| ·PCR-Southern试刘配制 | 第35-36页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第36-44页 |
| 1 玉米转化受体系统 | 第36页 |
| 2 质粒载体的构建 | 第36页 |
| 3 工程菌制备与愈伤组织的转化 | 第36-37页 |
| 4 抗性愈伤组织的筛选，分化与再生 | 第37-42页 |
| 5 T_0代再生植株的检测 | 第42-44页 |
| 第四部分 讨论 | 第44-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 主要仪器与试剂 | 第55页 |
