| 缩略语表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 第一部分 毛果芸香碱和M_3受体单克隆抗体对内皮细胞乙酰胆碱靶标功能的影响 | 第17-29页 |
| 材料与方法 | 第18-20页 |
| 1 实验材料 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-20页 |
| ·离体血管功能实验 | 第18-19页 |
| ·离体回肠平滑肌收缩实验 | 第19页 |
| ·给药方案 | 第19-20页 |
| ·数据处理 | 第20页 |
| 实验结果 | 第20-25页 |
| 1 毛果芸香碱对ACh介导的内皮依赖性血管舒张反应的影响 | 第20-23页 |
| ·毛果芸香碱对血管张力的调节作用 | 第20-21页 |
| ·毛果芸香碱对ACh介导的内皮依赖性血管舒张反应的影响 | 第21-23页 |
| 2 M_3受体抗体对ACh诱发内皮依赖性血管舒张反应的影响 | 第23-25页 |
| ·M_3受体抗体对ACh诱发内皮依赖性血管舒张反应的影响 | 第23-24页 |
| ·M_3受体抗体对ACh诱发离体回肠平滑肌收缩的影响 | 第24-25页 |
| 讨论 | 第25-26页 |
| 结语 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-29页 |
| 第二部分 血管内皮细胞蛋白抗体库的构建 | 第29-43页 |
| 材料与方法 | 第30-34页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-34页 |
| ·血管内皮细胞蛋白的制备 | 第31页 |
| ·动物免疫 | 第31页 |
| ·总RNA的提取与定量 | 第31-32页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| ·PCR扩增鼠抗体V_HV_L | 第32-33页 |
| ·拼接反应合成ScFv | 第33页 |
| ·ScFv上加入酶切位点及其纯化定量 | 第33页 |
| ·构建ScFv cDNA文库 | 第33-34页 |
| 实验结果 | 第34-37页 |
| 1 免疫BALB／c小鼠血清抗内皮细胞蛋白的IgG效价 | 第34页 |
| 2 RNA的含量测定、纯度鉴定 | 第34页 |
| 3 PCR组装ScFv cDNA文库 | 第34-37页 |
| ·PCR扩增V_HcDNA与V_LcDNA | 第36页 |
| ·PCR组装ScFv cDNA文库 | 第36-37页 |
| ·构建ScFv表达文库 | 第37页 |
| 讨论 | 第37-40页 |
| 结语 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第三部分 血管内皮细胞乙酰胆碱靶标抗体的筛选 | 第43-62页 |
| 材料和方法 | 第44-49页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-49页 |
| ·人脐静脉内皮细胞的复苏与培养 | 第45页 |
| ·噬菌体表面呈现及重组噬菌体制备 | 第45页 |
| ·抗体库的富集 | 第45-47页 |
| ·含有重组质粒细菌的培养及IPTG诱导表达 | 第47页 |
| ·周质蛋白的提取及蛋白定量 | 第47页 |
| ·影响ETA功能的单链抗体筛选 | 第47-48页 |
| ·影响ETA功能的单链抗体结合特异性及酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 实验结果 | 第49-56页 |
| 1 主动脉内皮细胞膜蛋白单链抗体的富集 | 第49页 |
| 2 离体血管功能实验筛选结果 | 第49-54页 |
| 3 单链抗体A鉴定结果 | 第54-56页 |
| ·单链抗体A对槟榔碱诱发内皮依赖性血管舒张反应的影响 | 第54-55页 |
| ·单链抗体A对槟榔碱诱发离体回肠平滑肌收缩的影响 | 第55页 |
| ·单链抗体A的SfiⅠ和NotⅠ双酶切产物鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·单链抗体A免疫组化结果 | 第56页 |
| 讨论 | 第56-59页 |
| 结语 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第四部分 培养传代对血管内皮细胞蛋白质表型的影响 | 第62-92页 |
| 材料和方法 | 第63-70页 |
| 1 实验材料 | 第63-65页 |
| 2 实验方法 | 第65-70页 |
| ·小牛主动脉内皮细胞分离、培养及鉴定 | 第65-66页 |
| ·细胞蛋白质的提取 | 第66-67页 |
| ·IPG-PEGT双向电泳 | 第67-68页 |
| ·图像分析及统计学处理 | 第68-69页 |
| ·蛋白质的原位脱色、酶解及萃取 | 第69-70页 |
| ·MALDI-TOF肽质谱指纹图 | 第70页 |
| ·质谱数据的数据搜寻 | 第70页 |
| 实验结果 | 第70-83页 |
| 1 内皮细胞的分离、培养及鉴定结果 | 第70-73页 |
| ·倒置显微镜下内皮细胞的生长特征 | 第70-71页 |
| ·Ⅷ因子相关抗原鉴定 | 第71页 |
| ·激光共聚焦测定单个内皮细胞[Ca]i | 第71-73页 |
| 2 蛋白质的提取与定量 | 第73页 |
| 3 传代前后血管内皮细胞总蛋白质的双向凝胶电泳银染图谱 | 第73-75页 |
| 4 2-DE图谱分析 | 第75-78页 |
| 5 差异蛋白质点的MALDI-TOF-MS肽质量指纹图谱分析 | 第78-83页 |
| 讨论 | 第83-88页 |
| 结语 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 研究总结 | 第92-93页 |
| 文献综述 | 第93-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 个人简历 | 第104页 |
