| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·尿酸与代谢 | 第11-13页 |
| ·尿酸的合成 | 第11-12页 |
| ·尿酸的降解与排出 | 第12-13页 |
| ·尿酸与人类疾病 | 第13-15页 |
| ·尿酸与心血管疾病 | 第13-14页 |
| ·尿酸与肾脏疾病 | 第14页 |
| ·尿酸与痛风 | 第14页 |
| ·尿酸与肿瘤 | 第14-15页 |
| ·尿酸氧化酶的应用 | 第15-17页 |
| ·Uox应用于临床检测 | 第15-16页 |
| ·Uox应用于临床治疗 | 第16-17页 |
| ·Uox研究概况 | 第17-19页 |
| ·不同微生物来源Uox特性的研究概况 | 第17-18页 |
| ·微生物来源Uox的重组表达研究概况 | 第18-19页 |
| ·DNA步移技术在基因克隆中的研究概况 | 第19-24页 |
| ·随机引物PCR | 第19-21页 |
| ·反向PCR | 第21-22页 |
| ·Sitefinding-PCR | 第22-24页 |
| ·本研究的目的及内容 | 第24-25页 |
| 第二章 尿酸氧化酶基因的克隆与表达 | 第25-41页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第25页 |
| ·其它试剂 | 第25-26页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第26页 |
| ·常用仪器 | 第26-27页 |
| ·一般方法 | 第27-30页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第29页 |
| ·目的基因片断的胶回收 | 第29页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| ·具体方法 | 第30-35页 |
| ·菌株ZZJ4-1基因组DNA的提取 | 第30页 |
| ·uox的克隆 | 第30-32页 |
| ·限制性内切酶双酶切 | 第32-33页 |
| ·表达载体的连接 | 第33页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第33-34页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第34页 |
| ·表达宿主菌E. coli BL21(DE3)的转化与诱导表达 | 第34页 |
| ·Uox酶活测定 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·uox的克隆结果与序列分析 | 第35-38页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·E. coli BL21(DE3)感受态细胞的转化及诱导表达 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第40-41页 |
| 第三章 尿酸氧化酶诱导表达的条件优化 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·试剂与培养基 | 第41页 |
| ·常用仪器 | 第41-42页 |
| ·一般方法 | 第42-43页 |
| ·培养条件 | 第42页 |
| ·生物量的测定 | 第42页 |
| ·粗酶液的提取 | 第42页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第42-43页 |
| ·Uox酶活测定 | 第43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第43页 |
| ·具体方法 | 第43-44页 |
| ·山梨醇浓度对诱导表达的影响 | 第43页 |
| ·加入IPTG时细菌生物量对诱导表达的影响 | 第43页 |
| ·IPTG浓度对诱导表达的影响 | 第43-44页 |
| ·诱导时间对诱导表达的影响 | 第44页 |
| ·诱导温度对诱导表达的影响 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-48页 |
| ·山梨醇浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·诱导前细菌生物量的确定 | 第45-46页 |
| ·IPTG浓度的确定 | 第46页 |
| ·诱导时间的确定 | 第46-47页 |
| ·诱导温度的确定 | 第47-48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 第四章 重组尿酸氧化酶的纯化与性质分析 | 第49-61页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第49-50页 |
| ·常用仪器 | 第50页 |
| ·重组Uox的纯化方法 | 第50-51页 |
| ·重组表达菌株的发酵 | 第50页 |
| ·粗酶液的纯化 | 第50页 |
| ·Ni-IDA柱层析纯化重组酶 | 第50-51页 |
| ·重组酶的盐析与透析 | 第51页 |
| ·重组Uox性质的分析方法 | 第51-52页 |
| ·分子量测定 | 第51页 |
| ·重组Uox的最佳反应温度和热稳定性试验 | 第51-52页 |
| ·重组Uox的最佳反应pH和pH稳定性试验 | 第52页 |
| ·酶促反应动力学 | 第52页 |
| ·不同化学物质对重组Uox的影响 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-60页 |
| ·重组酶的纯化 | 第52-54页 |
| ·重组Uox分子量测定 | 第54页 |
| ·重组Uox的最佳反应温度与热稳定性 | 第54-55页 |
| ·重组Uox的最佳反应pH与pH稳定性 | 第55-57页 |
| ·酶促反应动力学 | 第57页 |
| ·不同化学物质对酶活影响 | 第57-58页 |
| ·重组Uox和原酶的性质比较 | 第58-59页 |
| ·不同来源Uox性质的比较 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第61页 |
| ·创新点 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |