| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言与文献综述 | 第9-25页 |
| ·昆虫主要几种神经肽的分子生物学研究概述 | 第10-12页 |
| ·促前胸腺激素 | 第10页 |
| ·滞育激素 | 第10-11页 |
| ·信息素合成激活肽 | 第11页 |
| ·羽化激素 | 第11页 |
| ·脂动激素 | 第11-12页 |
| ·利尿激素和抗利尿激素 | 第12页 |
| ·昆虫神经肽保幼激素抑制素(Allatostatin，AST)的研究进展 | 第12-18页 |
| ·AST的分布 | 第12-13页 |
| ·昆虫个体水平上的分布 | 第13页 |
| ·在其他动物上的分布 | 第13页 |
| ·AST的初级结构及其与活性的关系 | 第13-14页 |
| ·AST的初级结构 | 第13-14页 |
| ·结构与活性关系 | 第14页 |
| ·AST生理功能及其作用途径 | 第14-16页 |
| ·AST生理功能特点的研究 | 第14-16页 |
| ·AST作用途径 | 第16页 |
| ·AST的代谢和降解 | 第16-17页 |
| ·AST的分子生物学研究 | 第17-18页 |
| ·AST在害虫防治中的可能性 | 第18页 |
| ·信号肽的研究 | 第18-21页 |
| ·信号假说 | 第18-19页 |
| ·信号肽的结构特点 | 第19页 |
| ·信号肽引导蛋白的跨越细胞膜机制 | 第19-20页 |
| ·信号肽的研究意义 | 第20-21页 |
| ·真核蛋白编码基因启动子 | 第21-23页 |
| ·TATA框 | 第22页 |
| ·Inr元件 | 第22页 |
| ·CAAT框与GC框 | 第22-23页 |
| ·其它 | 第23页 |
| ·本实验研究目的和意义 | 第23-24页 |
| ·本研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-38页 |
| ·材料与试剂 | 第25页 |
| ·动物材料 | 第25页 |
| ·质粒及菌种 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-38页 |
| ·蟋蟀AST基因信号肽序列的克隆 | 第25-31页 |
| ·蟋蟀基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·构建Genome Walker文库 | 第26-27页 |
| ·蟋蟀GenomeDNA酶切 | 第26页 |
| ·酶切后GenomeDNA的纯化 | 第26-27页 |
| ·纯化后的GenomeDNA与接头连接 | 第27页 |
| ·Genome Walker文库中的PCR | 第27-28页 |
| ·引物设计与合成 | 第27页 |
| ·第一轮PCR | 第27-28页 |
| ·第二轮PCR | 第28页 |
| ·PCR产物回收 | 第28-29页 |
| ·PCR片段的连接 | 第29页 |
| ·连接产物转化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的少量提取 | 第30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·阳性重组子测序 | 第31页 |
| ·蟋蟀AST基因启动子的克隆 | 第31-32页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第31页 |
| ·PCR | 第31页 |
| ·PCR产物的回收、连接及转化 | 第31-32页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第32页 |
| ·大肠杆菌分泌表达载体pET22ASG的构建 | 第32-36页 |
| ·表达载体质粒pET22b的制备 | 第32-33页 |
| ·pET22b表达载体质粒的转化 | 第32页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第32页 |
| ·质粒纯化 | 第32-33页 |
| ·中间载体pET22G的构建 | 第33-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第33页 |
| ·PCR | 第33页 |
| ·PCR产物回收 | 第33页 |
| ·PCR产物酶切及回收 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET22b的酶切 | 第34页 |
| ·PCR酶切产物与大肠杆菌表达载体pET22b的连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌分泌表达载体pET22ASG的构建 | 第34-36页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第35页 |
| ·PCR | 第35页 |
| ·PCR产物回收 | 第35页 |
| ·PCR产物酶切 | 第35-36页 |
| ·载体pET22G的酶切 | 第36页 |
| ·PCR酶切产物与表达载体pET22G的连接 | 第36页 |
| ·蟋蟀AST信号肽分泌蛋白功能的鉴定 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·pET22ASG的转化 | 第36-37页 |
| ·诱导表达 | 第37页 |
| ·GUS活性检测 | 第37-38页 |
| ·菌体胞内GUS检测 | 第37页 |
| ·菌体胞外GUS检测 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·蟋蟀AST基因信号肽序列的克隆 | 第38-41页 |
| ·蟋蟀基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·Genome Walker文库中的PCR | 第38-39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·序列结果分析 | 第39-41页 |
| ·蟋蟀AST基因启动子的克隆 | 第41-43页 |
| ·PCR结果 | 第41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·测序结果 | 第42页 |
| ·AST基因启动子序列分析 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET22ASG的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·中间载体pET22G的构建及鉴定 | 第43页 |
| ·表达载体pET22ASG的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·蟋蟀AST信号肽分泌蛋白功能的鉴定 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·基于PCR的Genome Walking(基因步移)技术 | 第45页 |
| ·关于高GC含量基因PCR条件的优化 | 第45-46页 |
| ·ast信号肽序列及其启动子的克隆分析 | 第46-47页 |
| ·AST信号肽分泌蛋白功能的鉴定分析 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 主要参考文献 | 第49-57页 |
| 图版 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
