| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 英文缩写表 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 融合蛋白基因工程应用及研究 | 第10-19页 |
| 1．1 融合基因的基本概念和特点 | 第10页 |
| 1．2 融合基因工程的发展和类别 | 第10-12页 |
| 1．3 融合基因工程在酶学研究方面的应用 | 第12-14页 |
| 1．3．1 方便酶的纯化 | 第12-13页 |
| 1．3．2 对酶进行示综 | 第13页 |
| 1．3．3 构建具有双酶活力的融合酶 | 第13-14页 |
| 1．4 融合基因技术在抗体/抗原制备中的应用 | 第14-16页 |
| 1．4．1 改变抗体/抗原的免疫原性 | 第14-15页 |
| 1．4．2 标记抗体/抗原 | 第15页 |
| 1．4．3 构建具有双抗原/抗体活力的融合抗原/抗体 | 第15-16页 |
| 1．5 本实验的目的和意义 | 第16页 |
| 1．6 结束语 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-19页 |
| 第二部分 实验 | 第19-46页 |
| 材料与方法 | 第19-31页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| 1．1 菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 1．2 培养基 | 第20页 |
| 1．3 试剂与材料 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-31页 |
| 2．1 偶联酶的筛选 | 第20-21页 |
| 2．2 大肠杆菌质粒的提取 | 第21-22页 |
| 2．3 PCR扩增ScFv基因 | 第22-23页 |
| 2．4 PCR扩增ScFv-Etag基因 | 第23-24页 |
| 2．5 PCR产物的加尾处理 | 第24页 |
| 2．6 PCR产物的末端粘性化 | 第24页 |
| 2．7 GOD-Linker基因的获取 | 第24-25页 |
| 2．8 双酶切产物的连接 | 第25-26页 |
| 2．9 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 2．9．1 感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2．9．2 转化 | 第26页 |
| 2．10 酵母的转化 | 第26-27页 |
| 2．11 蛋白质的诱导生成 | 第27-28页 |
| 2．12 GOD活力的鉴定 | 第28页 |
| 2．13 ScFv活力的鉴定 | 第28-29页 |
| 2．13．1 GLS中的ScFv活力的鉴定 | 第28-29页 |
| 2．13．2 单独表达的ScFv活力的鉴定 | 第29页 |
| 2．14 融合蛋白GLS活力的鉴定 | 第29-30页 |
| 2．15 SDS-PAGE分析蛋白浓度及分子量 | 第30页 |
| 2．16 蛋白质的纯化 | 第30页 |
| 2．17 蛋白质的浓度测定 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-43页 |
| 1 偶联酶的筛选 | 第31页 |
| 2 重组酵母表达载体的构建 | 第31-37页 |
| 2．1 pPIC9K-ScFv-Etag的构建 | 第31-34页 |
| 2．2 pPIC9K-GLS的构建 | 第34-36页 |
| 2．3 质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3 ScFv基因在甲基酵母中的初步表达 | 第37-39页 |
| 4 GLS融合蛋白在甲基酵母中的表达 | 第39-41页 |
| 4．1 转化 | 第39页 |
| 4．2 GLS融合蛋白的表达 | 第39-41页 |
| 4．2．1 GLS融合蛋白在GS115菌株中的表达 | 第39-41页 |
| 4．2．2 GLS融合蛋白在SMD1168菌株中的表达 | 第41页 |
| 5 GLS融合蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 6 GLS融合蛋白功能的鉴定 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 1 外源蛋白在甲基酵母中的高效表达 | 第43-44页 |
| 2 影响外源蛋白在甲基酵母中稳定性的因素 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 发表和待发表文章目录 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
