缩写表 | 第1-6页 |
中文摘要 | 第6-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
1 前言 | 第9-16页 |
·AP-2研究进展 | 第9-15页 |
·关于AP-2的结构 | 第9页 |
·AP-2的影响及功能 | 第9-12页 |
·AP-2在胚胎发育和组织分化中的表达和缺失后的影响 | 第9-10页 |
·AP-2在肿瘤发生与恶化中的作用 | 第10-11页 |
·AP-2在调节细胞生长、细胞程序性死亡和细胞分化中的作用 | 第11-12页 |
·P-2转录活性的机理 | 第12-15页 |
·AP-2蛋白的DNA结合域与特异DNA序列的亲和性调节 | 第12页 |
·信号通路的介导 | 第12-13页 |
·氧化还原机制 | 第13页 |
·与其他蛋白质形成复合物 | 第13-14页 |
·AP-2在细胞核与细胞质之间的变动分布 | 第14-15页 |
·AP-2α研究的设想 | 第15-16页 |
2 材料与方法 | 第16-28页 |
·材料和仪器 | 第16-20页 |
·仪器设备 | 第16页 |
·材料与试剂 | 第16-18页 |
·一般试剂 | 第16-17页 |
·酵母双杂交系统所需材料与试剂 | 第17-18页 |
·GST基因融合系统所需材料与试剂 | 第18页 |
·所需溶液 | 第18-20页 |
·实验方法 | 第20-28页 |
·酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system) | 第20-23页 |
·系统简介 | 第20-21页 |
·AP-2α的亚克隆 | 第21页 |
·质粒pDBLeu-AP-2α转化酵母菌Mav203 | 第21-22页 |
·第二次转化率的测定与稳定 | 第22页 |
·文库的转化 | 第22页 |
·蓝斑试验 | 第22-23页 |
·对于阳性克隆中所带cDNA序列进行鉴定 | 第23页 |
·GST基因融合系统(GST gene fusion system) | 第23-24页 |
·GST基因融合系统简介 | 第23页 |
·各片段的亚克隆 | 第23-24页 |
·融合蛋白GST-X的表达 | 第24页 |
·GST-X融合蛋白的纯化 | 第24页 |
·AP-2α蛋白的鉴定及其与DNA结合活性检测 | 第24-26页 |
·各段AP-2α蛋白的表达检测 | 第24-25页 |
·竞争性电泳迁移率变动实验(competitive gel shift assay) | 第25-26页 |
·抗体的制备 | 第26-27页 |
·HeLa细胞的细胞质与细胞核蛋白的分离与检测 | 第27-28页 |
3 结果与分析 | 第28-39页 |
·酵母双杂交 | 第28-31页 |
·pDBLeu-AP-2α质粒的构建 | 第28-29页 |
·文库筛选前系统的假阳性排除实验结果 | 第29页 |
·文库筛选与进一步假阳性排除实验结果 | 第29-31页 |
·阳性克隆中所连入的文库cDNA的鉴定 | 第31-32页 |
·表达质粒的构建 | 第32-33页 |
·GST-X融合蛋白的表达与纯化 | 第33-35页 |
·各段AP-2α融合蛋白的表达检测及AP-2α蛋白与DNA结合活性检测 | 第35-36页 |
·抗体的制备 | 第36-37页 |
·HeLa细胞中AP-2α,TESTIN,ACTN1蛋白的检测 | 第37-39页 |
4 讨论 | 第39-42页 |
参考文献 | 第42-47页 |
致谢 | 第47-48页 |
附录1 论文原创性声明 | 第48页 |