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与转录因子AP-2α相互作用的蛋白质的鉴定

缩写表第1-6页
中文摘要第6-7页
英文摘要第7-9页
1 前言第9-16页
   ·AP-2研究进展第9-15页
     ·关于AP-2的结构第9页
     ·AP-2的影响及功能第9-12页
       ·AP-2在胚胎发育和组织分化中的表达和缺失后的影响第9-10页
       ·AP-2在肿瘤发生与恶化中的作用第10-11页
       ·AP-2在调节细胞生长、细胞程序性死亡和细胞分化中的作用第11-12页
     ·P-2转录活性的机理第12-15页
       ·AP-2蛋白的DNA结合域与特异DNA序列的亲和性调节第12页
       ·信号通路的介导第12-13页
       ·氧化还原机制第13页
       ·与其他蛋白质形成复合物第13-14页
       ·AP-2在细胞核与细胞质之间的变动分布第14-15页
   ·AP-2α研究的设想第15-16页
2 材料与方法第16-28页
   ·材料和仪器第16-20页
     ·仪器设备第16页
     ·材料与试剂第16-18页
       ·一般试剂第16-17页
       ·酵母双杂交系统所需材料与试剂第17-18页
       ·GST基因融合系统所需材料与试剂第18页
     ·所需溶液第18-20页
   ·实验方法第20-28页
     ·酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)第20-23页
       ·系统简介第20-21页
       ·AP-2α的亚克隆第21页
       ·质粒pDBLeu-AP-2α转化酵母菌Mav203第21-22页
       ·第二次转化率的测定与稳定第22页
       ·文库的转化第22页
       ·蓝斑试验第22-23页
       ·对于阳性克隆中所带cDNA序列进行鉴定第23页
     ·GST基因融合系统(GST gene fusion system)第23-24页
       ·GST基因融合系统简介第23页
       ·各片段的亚克隆第23-24页
       ·融合蛋白GST-X的表达第24页
       ·GST-X融合蛋白的纯化第24页
     ·AP-2α蛋白的鉴定及其与DNA结合活性检测第24-26页
       ·各段AP-2α蛋白的表达检测第24-25页
       ·竞争性电泳迁移率变动实验(competitive gel shift assay)第25-26页
     ·抗体的制备第26-27页
     ·HeLa细胞的细胞质与细胞核蛋白的分离与检测第27-28页
3 结果与分析第28-39页
   ·酵母双杂交第28-31页
     ·pDBLeu-AP-2α质粒的构建第28-29页
     ·文库筛选前系统的假阳性排除实验结果第29页
     ·文库筛选与进一步假阳性排除实验结果第29-31页
   ·阳性克隆中所连入的文库cDNA的鉴定第31-32页
   ·表达质粒的构建第32-33页
   ·GST-X融合蛋白的表达与纯化第33-35页
   ·各段AP-2α融合蛋白的表达检测及AP-2α蛋白与DNA结合活性检测第35-36页
   ·抗体的制备第36-37页
   ·HeLa细胞中AP-2α,TESTIN,ACTN1蛋白的检测第37-39页
4 讨论第39-42页
参考文献第42-47页
致谢第47-48页
附录1 论文原创性声明第48页

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