| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-14页 |
| 第一部分 文献综述及本研究的目的和意义 | 第14-54页 |
| 第一章 蜜蜂蜂毒的研究进展 | 第15-31页 |
| 1 蜂毒的来源 | 第15-16页 |
| 2 蜂毒的理化特性 | 第16-17页 |
| 3 蜂毒的成分 | 第17-25页 |
| 3．1 溶血肽 | 第19-20页 |
| 3．2 磷脂酶A_2 | 第20-21页 |
| 3．3 透明质酸酶 | 第21-22页 |
| 3．4 明肽 | 第22-23页 |
| 3．5 镇静肽 | 第23-24页 |
| 3．6 肥大细胞脱粒肽 | 第24-25页 |
| 4 蜂毒的药理作用 | 第25-27页 |
| 4．1 对神经系统的作用 | 第25页 |
| 4．2 对心血管系统的作用 | 第25页 |
| 4．3 抗凝和溶血作用 | 第25-26页 |
| 4．4 对消化系统的作用 | 第26页 |
| 4．5 抗炎作用 | 第26页 |
| 4．6 抗肿瘤作用 | 第26页 |
| 4．7 抗菌作用 | 第26页 |
| 4．8 免疫抑制作用 | 第26-27页 |
| 5 蜂疗的起源 | 第27-28页 |
| 6 蜂毒的制剂 | 第28页 |
| 7 蜂毒疗法的主要治疗方法 | 第28-29页 |
| 8 蜂毒的应用 | 第29-30页 |
| 8．1 蜂毒的临床应用 | 第29页 |
| 8．2 蜂毒在生物工程上的应用 | 第29-30页 |
| 8．3 蜂毒在农业上的应用 | 第30页 |
| 9 展望 | 第30-31页 |
| 第二章 胡蜂蜂毒的研究进展 | 第31-41页 |
| 1 胡蜂蜂毒的来源 | 第31-33页 |
| 2 胡蜂蜂毒的成分 | 第33-36页 |
| 3 胡蜂蜂毒的生化特征 | 第36-37页 |
| 4 胡蜂蜂毒的药理学特征 | 第37-38页 |
| 5 胡蜂毒过敏及其症状 | 第38-39页 |
| 7 胡蜂毒在医学上的应用 | 第39-40页 |
| 8 展望 | 第40-41页 |
| 第三章 蜂毒溶血肽基因的研究进展 | 第41-50页 |
| 1 溶血肽的特性 | 第41-42页 |
| 2 溶血肽的制备 | 第42页 |
| 3 溶血肽的活性测定 | 第42-43页 |
| 4 溶血肽的克隆与表达 | 第43-45页 |
| 5 溶血肽的结构 | 第45-46页 |
| 6 溶血肽的构效关系 | 第46-47页 |
| 7 溶血肽的功能 | 第47-48页 |
| 7．1 溶血肽的抗菌作用 | 第47页 |
| 7．2 溶血肽的抗艾滋病毒的作用 | 第47-48页 |
| 7．3 溶血肽的抗肿瘤作用 | 第48页 |
| 8 溶血肽的应用 | 第48-49页 |
| 8．1 临床应用 | 第48页 |
| 8．2 在植物保护上的应用 | 第48-49页 |
| 8．3 作为模型肽 | 第49页 |
| 9 展望 | 第49-50页 |
| 第四章 本研究目的、意义和技术路线 | 第50-54页 |
| 1 本研究的目的和意义 | 第50-51页 |
| 2 研究内容 | 第51-52页 |
| 3 研究的技术路线 | 第52-54页 |
| 3．1 溶血肽基因的克隆、兔抗溶血肽多抗血清的制备和在E．coli中的表达 | 第52-53页 |
| 3．2 溶血肽在昆虫杆状病毒细胞中的表达 | 第53页 |
| 3．3 前溶血肽原基因在昆虫杆状病毒系统中的表达 | 第53-54页 |
| 第二部分 研究内容 | 第54-146页 |
| 第五章 前溶血肽原基因的克隆与序列比较 | 第55-70页 |
| 1 材料和方法 | 第55-63页 |
| 2 结果 | 第63-68页 |
| 2．1 6种蜂毒腺总RNA样品的浓度和纯度 | 第63页 |
| 2．2 RT-PCR扩增蜂毒前溶血肽原基因 | 第63-64页 |
| 2．3 克隆与鉴定 | 第64-65页 |
| 2．4 序列分析 | 第65-68页 |
| 2．5 聚类分析 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 兔抗溶血肽多克隆抗体的制备和鉴定 | 第70-75页 |
| 1 材料与方法 | 第70-73页 |
| 2 结果 | 第73-74页 |
| 2．1 多克隆抗体的鉴定和效价测定 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 第七章 溶血肽基因在大肠杆菌中表达的研究 | 第75-101页 |
| 1 材料和方法 | 第75-84页 |
| 2 结果 | 第84-99页 |
| 2．1 溶血肽基因的扩增、克隆及鉴定 | 第84-85页 |
| 2．2 融合蛋白在大肠杆菌中表达 | 第85-87页 |
| 2．2．1 表达载体的构建 | 第85-87页 |
| 2．2．2 融合蛋白在大肠杆菌中表达 | 第87页 |
| 2．3 表达产物的抗原性鉴定 | 第87-90页 |
| 2．3．1 Western blotting | 第87-88页 |
| 2．3．2 三抗夹心ELISA鉴定 | 第88-90页 |
| 2．4 溶血肽基因表达条件的优化 | 第90-98页 |
| 2．4．1 不同OD_（600）诱导 | 第90-92页 |
| 2．4．2 不同浓度IPTG诱导 | 第92-94页 |
| 2．4．3 不同温度下诱导 | 第94-96页 |
| 2．4．4 不同诱导时间 | 第96-98页 |
| 2．5 基因产物的纯化和酶解 | 第98-99页 |
| 2．6 活力的初步测定 | 第99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 第八章 溶血肽基因在昆虫细胞中的表达 | 第101-143页 |
| 第一节 溶血肽与谷胱甘肽基因融合在昆虫细胞中的表达 | 第101-119页 |
| 1 材料和方法 | 第101-106页 |
| 2 结果 | 第106-117页 |
| 2．1 溶血肽和谷胱甘肽融合基因的克隆和鉴定 | 第106-107页 |
| 2．2 重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第107-108页 |
| 2．3 重组病毒DNA的获得 | 第108-109页 |
| 2．4 细胞中重组病毒粒子的PeR检测 | 第109页 |
| 2．5 GST-Melittin在昆虫细胞中的表达 | 第109-112页 |
| 2．5．1 SDS-PAGE电泳 | 第109-110页 |
| 2．5．2 Western blotting | 第110-111页 |
| 2．5．3 三抗夹心Elisa鉴定 | 第111-112页 |
| 2．6 表达时相和对细胞的影响 | 第112-117页 |
| 2．7 活力的初步测定 | 第117页 |
| 3 讨论 | 第117-119页 |
| 第二节 溶血肽与绿色荧光基因融合在昆虫细胞中的表达 | 第119-130页 |
| 1 材料和方法 | 第119-121页 |
| 2 结果 | 第121-129页 |
| 2．1 重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第121页 |
| 2．2 重组病毒DNA的获得 | 第121-122页 |
| 2．3 细胞中重组病毒粒子的PCR检测 | 第122-123页 |
| 2．4 GFPT-Melittin在昆虫细胞中的表达 | 第123-125页 |
| 2．4．1 SDS-PAGE电泳 | 第123-124页 |
| 2．4．2 Western blotting | 第124-125页 |
| 2．5 病毒滴度测定 | 第125-127页 |
| 2．6 表达时相和对细胞的影响 | 第127-129页 |
| 3 讨论 | 第129-130页 |
| 第三节 前溶血肽原与绿色荧光基因融合在昆虫细胞中的表达 | 第130-143页 |
| 1 材料和方法 | 第130-131页 |
| 2 结果 | 第131-141页 |
| 2．1 重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第131-132页 |
| 2．2 重组病毒DNA的获得 | 第132-133页 |
| 2．3 细胞中重组病毒粒子的PCR检测 | 第133-134页 |
| 2．4 ELISA鉴定 | 第134-137页 |
| 2．5 病毒滴度测定 | 第137-139页 |
| 2．6 表达时相和对细胞的影响 | 第139-141页 |
| 3 讨论 | 第141-143页 |
| 第九章 主要结论 | 第143-146页 |
| 参考文献 | 第146-158页 |
| 附录一 攻读博士学位期间发表的论文和申请专利的目录及各蜂前溶血肽原基因在GenBank中的登录号 | 第158-160页 |
| 附录二 专利申请受理通知书 | 第160-163页 |
| 附录三 各蜂前溶血肽原基因测序图 | 第163-168页 |
