广谱拮抗菌阴沟肠杆菌B8菌株拮抗相关基因片段的克隆及序列分析
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 一 前言 | 第9-11页 |
| 二 材料与方法 | 第11-27页 |
| （一） 材料 | 第11-17页 |
| 1 菌株 | 第11页 |
| 2 质粒 | 第11页 |
| 3 培养基 | 第11页 |
| 4 主要化学试剂 | 第11-14页 |
| 5 酶 | 第14页 |
| 6 抗生素 | 第14页 |
| 7 引物 | 第14-15页 |
| 8 GPS-1试剂盒 | 第15页 |
| 9 实验动物 | 第15-17页 |
| （二） 方法 | 第17-27页 |
| 1 动物实验 | 第17页 |
| 2 细菌基因组DNA的大量制备 | 第17页 |
| 3 碱法小量提取质粒DNA | 第17-18页 |
| 4 感受态细胞的制备 | 第18页 |
| 5 转化 | 第18页 |
| 6 重组克隆的筛选、鉴定 | 第18-19页 |
| 7 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| 8 pF质粒的亚克隆 | 第19-20页 |
| 8．1 pF质粒的酶切 | 第19页 |
| 8．2 酶切产物的抽提、沉淀 | 第19-20页 |
| 8．3 酶切产物的自连 | 第20页 |
| 9 pB质粒的亚克隆 | 第20-21页 |
| 9．1 pB质粒的部分酶切 | 第20页 |
| 9．2 酶切产物的补平 | 第20-21页 |
| 9．3 酶切产物的自连 | 第21页 |
| 10 染色体爬行 | 第21-23页 |
| 10．1 引物稀释 | 第21页 |
| 10．2 接头DNA的准备 | 第21页 |
| 10．3 模板的准备 | 第21-22页 |
| 10．4 LAPCR | 第22页 |
| 10．5 PCR产物的纯化 | 第22-23页 |
| 11 PCR产物的克隆 | 第23页 |
| 12 亚克隆的测序 | 第23页 |
| 13 GPS-1系统测序 | 第23页 |
| 14 测序结果的比较、分析 | 第23-27页 |
| 三 结果分析 | 第27-53页 |
| 1 pF质粒的亚克隆。 | 第27-33页 |
| 1．1 pF质粒的酶切分析 | 第27页 |
| 1．2 自连产物的筛选、鉴定 | 第27-29页 |
| 1．3 亚克隆测序结果比较 | 第29-30页 |
| 1．4 F片段的BLAST分析 | 第30-33页 |
| 2 pB质粒的亚克隆 | 第33-47页 |
| 2．1 pB质粒的部分酶切分析 | 第33-34页 |
| 2．2 自连产物的筛选、鉴定 | 第34-37页 |
| 2．3 亚克隆测序结果比较 | 第37-40页 |
| 2．4 B片段部分序列的BLAST分析 | 第40-47页 |
| 3 GPS-1系统测序结果分析 | 第47页 |
| 4 动物实验 | 第47-48页 |
| 4．1 细菌记数 | 第47页 |
| 4．2 小鼠攻毒结果分析 | 第47-48页 |
| 5 染色体爬行 | 第48-53页 |
| 5．1 接头设计分析 | 第48页 |
| 5．2 引物设计分析 | 第48-49页 |
| 5．3 基因组DNA的酶切分析 | 第49-50页 |
| 5．4 PCR结果分析 | 第50-51页 |
| 5．5 PCR产物的克隆及序列分析 | 第51-53页 |
| 四 讨论与结论 | 第53-55页 |
| 1 关于F基因 | 第53页 |
| 2 B基因与毒力岛的关系 | 第53-54页 |
| 3 染色体爬行 | 第54-55页 |
| 文献综述 | 第55-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
