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我国间日疟原虫SSUrDNA特定片段体外扩增、序列变异分析及检测的研究

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-13页
缩略语表第13-16页
文献回顾第16-38页
 1.rDNA(rRNA)的基本结构特征第16-19页
 2.rDNA(rRNA)特定片段和序列分析在原虫种、株鉴定中的应用第19-30页
 3.rDNA(rRNA)的检测及其在疟疾和某些原虫感染诊断中的应用第30-38页
前言第38-40页
实验材料第40-47页
 1.细菌菌种第40页
 2.噬菌体载体第40页
 3.限制性内切酶第40页
 4.其它核酸修饰酶第40-42页
 5.生化试剂及物品第42-44页
 6.各种样本第44-45页
 7.主要仪器第45-47页
实验方法第47-60页
 第一部分 间日疟原虫SSUrDNA特定片段体外扩增及鉴定第47-53页
  1.寡聚核苷酸引物的设计第47页
  2.间日疟原虫SSUrDNA特定片段的体外扩增第47-49页
   ·样本DNA的提取第47-48页
   ·PCR扩增第48页
   ·产物的观察第48-49页
   ·目的片段的回收第49页
  3.间日疟原虫DNA扩增片段的鉴定第49-53页
   ·限制性酶切电泳第49页
   ·Northern印迹杂交第49-53页
 第二部分 间日疟原虫SSUrDNA特定片段定向克隆及测序分析第53-58页
  1.间日疟原虫SSUrDNA特定片段的定向克隆第53-57页
   ·特定片段及载体的处理第53页
   ·连接反应第53页
   ·感受态宿主菌的制备第53-55页
   ·宿主菌的转化和筛选第55页
   ·重组克隆的鉴定第55-57页
  2.间日疟原虫SSUrDNA特定片段的测序分析第57-58页
   ·测序变性凝胶的灌制第57页
   ·测序反应第57页
   ·电泳及放射自显影第57-58页
   ·DNA序列分析第58页
 第三部分 巢式PCR扩增SSUrDNA特定片段用于P.v检测及鉴定第58-60页
  1.内引物的设计第58页
  2.样本DNA的快速萃取第58-59页
   ·冻存血样或培养物DNA萃取第58-59页
   ·滤纸血样DNA萃取第59页
  3.巢式PCR第59-60页
结果第60-87页
 第一部分 间日疟原虫SSUrDNA特定片段体外扩增及鉴定第60-66页
  1.寡聚核苷酸引物的设计第60-62页
  2.间日疟原虫SSUrDNA特定片段的体外扩增第62-63页
  3.间日疟原虫DNA扩增片段的鉴定第63-66页
   ·限制性内切酶酶切分析第63-65页
   ·Northen印迹杂交分析第65-66页
 第二部分 间日疟原虫SSUrDNA特定片段定向克隆及测序分析第66-79页
  1.间日疟原虫SSUrDNA扩增片段重组克隆的鉴定第66-69页
  2.间日疟原虫不同地理株SSUrDNA扩增片段的序列分析第69-79页
 第三部分 巢式PCR扩增SSUrDNA特定片段用于P.v检测及鉴定第79-87页
  1.巢式PCR内引物的设计第79-80页
  2.巢式PCR扩增技术用于P.v的检测及鉴定第80-87页
   ·巢式PCR检测P.v的灵敏度第80-81页
   ·巢式PCR检测P.v的特异性第81-82页
   ·不同疟区血样P.v的检测第82-83页
   ·滤纸保存血样P.v检测的效果观察第83-84页
   ·间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染的鉴定第84-87页
讨论第87-101页
 1.关于P.vSSUrDNA特定片段体外扩增的引物设计第87-88页
 2.关于双温度点PCR扩增方法的建立第88-91页
 3.关于扩增片段的鉴定第91-92页
 4.关于扩增片段的克隆及鉴定第92-93页
 5.关于rDNA序列水平的变异分析第93-95页
 6.关于PCR模板的制备第95-97页
 7.关于双温度点巢式PCR方法的建立及应用前景第97-101页
小结第101-102页
致谢第102-103页
参考文献第103-106页

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