| 内容提要 | 第1-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-22页 |
| 第一节 基因治疗简介 | 第8-10页 |
| ·基因治疗载体 | 第8-9页 |
| ·腺病毒作为基因治疗载体 | 第9-10页 |
| 第二节 腺病毒载体 | 第10-16页 |
| ·腺病毒简介 | 第10-11页 |
| ·腺病毒治疗的靶向性 | 第11-13页 |
| ·条件复制型腺病毒 | 第13-16页 |
| 第三节 肿瘤特异性启动子 | 第16-19页 |
| ·肿瘤特异性启动子概述 | 第16页 |
| ·Survivin 启动子简介 | 第16-18页 |
| ·COX-2 启动子简介 | 第18-19页 |
| 第四节 双自杀基因协同作用 | 第19-20页 |
| 第五节 本论文实验设计构思 | 第20-22页 |
| ·本论文实验构思 | 第20页 |
| ·实验思路 | 第20-21页 |
| ·主要实验步骤 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第22-36页 |
| 第一节 材料、仪器和试剂 | 第22-25页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·常用试剂配置 | 第24-25页 |
| 第二节 实验方法 | 第25-36页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第25-26页 |
| ·质粒的大量提取 | 第26-27页 |
| ·质粒的定量测定 | 第27页 |
| ·大肠杆菌 E.coli 化学感受态的制备 | 第27-28页 |
| ·连接产物转化 E.coli 感受态细胞 | 第28页 |
| ·蓝白筛选 | 第28页 |
| ·限制性内切酶作用 | 第28-29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第30-31页 |
| ·用Western-blot 检测蛋白表达 | 第31-32页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第32页 |
| ·利用Lipofectamine2000 包装重组腺病毒 | 第32-33页 |
| ·重组腺病毒的大量扩增 | 第33页 |
| ·重组腺病毒的纯化 | 第33-34页 |
| ·重组腺病毒的滴度测定 | 第34-35页 |
| ·病毒复制倍数检测 | 第35页 |
| ·MTT 法检测细胞体外活性 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-58页 |
| 第一节 重组腺病毒AD-RGD-SUR-E1 的构建 | 第36-42页 |
| ·质粒pT－SUR 的构建 | 第36-37页 |
| ·质粒pT－E1 的构建 | 第37-39页 |
| ·质粒pShu-SUR 的构建 | 第39-40页 |
| ·质粒pShu-SUR-E1 的构建 | 第40-41页 |
| ·重组腺病毒Ad-RGD-SUR-E1 的构建 | 第41-42页 |
| 第二节 重组腺病毒AD-RGD-COX-2-TK-IRES-NTR的构建 | 第42-46页 |
| ·质粒pT-COX-2 的构建 | 第42-43页 |
| ·质粒pShu-COX-2 -TK-IRES- NTR 的构建 | 第43-45页 |
| ·重组腺病毒Ad-RGD-COX-2-TK-IRES-NTR 的构建 | 第45-46页 |
| 第三节 重组腺病毒AD-RGD-COX-2-TK-IRES- NTR-SUR-E1的构建 | 第46-49页 |
| ·质粒pShu-COX-2-TK-IRES-NTR-SUR-E1 的构建 | 第46-47页 |
| ·重组腺病毒Ad-RGD-COX-2-TK-IRES-NTR- SUR-E1 的构建 | 第47-49页 |
| 第四节 重组腺病毒AD-RGD-SUR-E1 的扩增、纯化及滴度测定 | 第49-53页 |
| ·重组腺病毒Ad-RGD-SUR-E1 的扩增 | 第49页 |
| ·重组腺病毒Ad-RGD-SUR-E1 的鉴定 | 第49-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 第五节 重组腺病毒AD-RGD-SUR-E1 在体外对ZR-75-30 细胞的特异性抑制 | 第53-55页 |
| ·Western 印迹检测腺病毒E1A 的表达 | 第53-54页 |
| ·病毒增殖实验 | 第54页 |
| ·细胞生长抑制实验 | 第54-55页 |
| 小结 | 第55页 |
| 第六节 结论 | 第55-56页 |
| 第七节 前景展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 中文摘要 | 第62-65页 |
| Abstract | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 导师简介 | 第70-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
