| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| ·棉花黄萎病的发生及危害 | 第12-13页 |
| ·棉花黄萎病的病原菌 | 第13-14页 |
| ·棉花黄萎病菌的致病力分化 | 第14-15页 |
| ·黄萎病菌的致病机理 | 第15-16页 |
| ·大丽轮枝菌致病的分子机制研究 | 第16-18页 |
| ·农杆菌介导的真菌遗传转化 | 第18-20页 |
| ·利用插入突变标记、克隆相关基因 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·培养基及培养条件 | 第23-25页 |
| ·抗生素配制及使用浓度 | 第25页 |
| ·常规DNA操作方法 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| ·农杆菌的转化 | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·农杆菌的转化 | 第27页 |
| ·菌落PCR | 第27页 |
| ·黄萎病菌的遗传转化 | 第27-29页 |
| ·农杆菌的准备 | 第27-28页 |
| ·黄萎病菌的准备 | 第28页 |
| ·共培养 | 第28页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第28-29页 |
| ·突变体单菌落的获得 | 第29页 |
| ·突变体的分子鉴定 | 第29-30页 |
| ·总DNA快速提取 | 第29页 |
| ·突变体的PCR检测 | 第29-30页 |
| ·突变体生长量的测定 | 第30页 |
| ·突变体在基本培养基上的生长 | 第30页 |
| ·突变体产孢量的测定 | 第30页 |
| ·突变体胞外酶的检测 | 第30-32页 |
| ·胞外蛋白酶的检测 | 第30页 |
| ·淀粉酶的检测 | 第30-31页 |
| ·纤维素酶的检测 | 第31页 |
| ·果胶酶的检测 | 第31页 |
| ·几丁质酶的检测 | 第31-32页 |
| ·致病性试验 | 第32页 |
| ·TAIL-PCR获得插入位点侧翼序列 | 第32页 |
| ·突变基因的序列比对 | 第32-34页 |
| 第三章 真菌表达载体的构建 | 第34-40页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·大丽轮枝菌不识别CAMV35S启动子 | 第34-35页 |
| ·真菌表达载体PCTHYG的构建 | 第35-37页 |
| ·重组质粒的分子验证 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 转化条件的优化和突变体筛选鉴定 | 第40-49页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·黄萎病菌T-DNA插入条件的优化 | 第41-44页 |
| ·预培养添加AS不是必需 | 第41-42页 |
| ·共培养必需添加AS | 第42页 |
| ·共培养时间不同转化效率不同 | 第42-43页 |
| ·多种滤膜可用于大丽轮枝菌的遗传转化 | 第43-44页 |
| ·萌发的孢子有利于转化 | 第44页 |
| ·棉花黄萎病菌VD991的遗传转化 | 第44-46页 |
| ·优化的转化程序 | 第44-45页 |
| ·黄萎病菌插入突变体的获得 | 第45-46页 |
| ·突变体的分子鉴定 | 第46-47页 |
| ·突变体稳定性的鉴定 | 第47-48页 |
| ·大丽轮枝菌VD991潮霉素抗性实验 | 第47页 |
| ·突变体潮霉素抗性的稳定性 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 突变体的表型鉴定 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·突变体的菌落形态和生长情况 | 第49-55页 |
| ·突变体的菌落形态 | 第49-50页 |
| ·突变体的生长情况 | 第50-55页 |
| ·突变体的胞外水解酶 | 第55-59页 |
| ·蛋白酶 | 第55页 |
| ·淀粉酶 | 第55-56页 |
| ·纤维素酶 | 第56-57页 |
| ·果胶酶 | 第57-58页 |
| ·几丁质酶 | 第58-59页 |
| ·突变体的致病性鉴定 | 第59-61页 |
| ·H1-H20突变体的致病性 | 第59-60页 |
| ·果胶酶分泌降低突变体的致病性 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 T-DNA插入位点侧翼序列的获得和序列分析 | 第63-72页 |
| ·引言 | 第63-64页 |
| ·TAIL-PCR方法获得T-DNA插入位点侧翼序列 | 第64-65页 |
| ·突变体T-DNA侧翼序列的分析 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-72页 |
| 第七章 全文结论 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·后续工作展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 附录1 突变体T-DNA插入位点右侧序列 | 第83-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 博士及博士后期间发表的学术论文 | 第94-95页 |
| 个人简历 | 第95-98页 |