| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-17页 |
| ·双孢蘑菇 | 第8-9页 |
| ·双孢蘑菇褐变研究进展 | 第9-10页 |
| ·褐变机理 | 第9页 |
| ·褐变因素 | 第9-10页 |
| ·多酚氧化酶研究进展 | 第10-14页 |
| ·多酚氧化酶概述 | 第10页 |
| ·多酚氧化酶催化的反应及其作用 | 第10-12页 |
| ·多酚氧化酶基因的特点 | 第12-13页 |
| ·多酚氧化酶的结构与功能 | 第13-14页 |
| ·常用外源表达系统 | 第14-15页 |
| ·多酚氧化酶研究发展前景 | 第15-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-29页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·菌株和载体 | 第18页 |
| ·药品与试剂 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·仪器设备 | 第18页 |
| ·流程 | 第18-20页 |
| ·双孢蘑菇PPO基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·双孢蘑菇PPO基因在大肠杆菌中的表达 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-29页 |
| ·总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR | 第21-26页 |
| ·PCR扩增PPO保守区的cDNA | 第21-22页 |
| ·3'-RACE和5'-RACE的PCR扩增 | 第22-25页 |
| ·PPO全长cDNA的扩增 | 第25-26页 |
| ·扩增产物的克隆及测序 | 第26页 |
| ·序列分析及同源性比较 | 第26页 |
| ·双孢蘑菇PPO基因的半定量RT-PCR | 第26-27页 |
| ·重组载体的构建 | 第27页 |
| ·大肠杆菌阳性转化子的获得 | 第27页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第27-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-42页 |
| ·多酚氧化酶基因的克隆 | 第29-35页 |
| ·双孢蘑菇总RNA提取 | 第29页 |
| ·双孢蘑菇PPO基因的克隆 | 第29-35页 |
| ·双孢蘑菇PPO保守区cDNA的PCR扩增 | 第29页 |
| ·双孢蘑菇PPO保守区cDNA的测序 | 第29-31页 |
| ·双孢蘑菇PPO cDNA的3'-RACE和5'-RACE | 第31页 |
| ·双孢蘑菇PPO全长cDNA的扩增 | 第31-32页 |
| ·双孢蘑菇PPO全长cDNA序列的测定 | 第32-35页 |
| ·双孢蘑菇PPO序列同源性及进化树分析 | 第35-39页 |
| ·双孢蘑菇PPO基因的半定量分析 | 第39页 |
| ·双孢蘑菇PPO基因在大肠杆菌中的表达 | 第39-42页 |
| 5 结论与讨论 | 第42-44页 |
| ·结论 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| ABSTRACT | 第50-51页 |