| 致谢 | 第1-6页 |
| 前言 | 第6-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 目次 | 第15-20页 |
| 第一部分 全反式维甲酸诱导骨肉瘤细胞分化及作用机制研究 | 第20-47页 |
| ·实验仪器与材料 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-35页 |
| 1.人骨肉瘤细胞常规培养 | 第23页 |
| 2.台盼蓝拒染法检测维甲酸抑制入骨肉瘤细胞增殖活性 | 第23页 |
| 3.流式细胞术检测U2OS和MG63细胞周期的变化 | 第23-24页 |
| 4.RT-PCR骨肉瘤细胞分化标记基因表达水平的变化 | 第24-26页 |
| 5.基因芯片检测全反式维甲酸作用的人骨肉瘤细胞相关基因的变化 | 第26-35页 |
| 6.Western Blot检测相关蛋白变化 | 第35页 |
| 7.数据分析 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-45页 |
| 1.全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞增殖的影响 | 第35-36页 |
| 2.全反式维甲酸对U2OS和MG63细胞周期的影响 | 第36-37页 |
| 3.全反式维甲酸对入骨肉瘤细胞蛋白表达的影响 | 第37-39页 |
| 4.全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞分化标记物的影响 | 第39页 |
| 5.基因芯片检测全反式维甲酸诱导的基因表达谱改变 | 第39-41页 |
| 6.基因芯片检测维甲酸受体相关通路基因的表达 | 第41-42页 |
| 7.基因芯片检测成骨细胞分化相关通路基因的表达 | 第42-44页 |
| 8.基因芯片检测细胞因子基因的表达 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第二部分 金反式维甲酸诱导造血干细胞分化的机制研究 | 第47-65页 |
| ·实验仪器与材料 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| 1.人造血干细胞(HSC)、粒性分化早期的造血干细胞(CMP)和粒性分化晚期的造血干细胞(GMP)的分选 | 第49-50页 |
| 2.人骨髓基质细胞的培养及培养液的收集 | 第50页 |
| 3.人CD34+,HSC,CMP和GMP细胞的体外扩增 | 第50-51页 |
| 4.台盼蓝拒染法检测维甲酸抑制人HSC,CMP,GMP及人急性髓性白血病增殖活性 | 第51页 |
| 5.吉姆萨染色检测全反式维甲酸对HSC,CMP和GMP细胞形态的影响 | 第51页 |
| 6.RT-PCR检测全反式维甲酸诱导HSC,CMP,GMP和CD34+细胞分化的相关基因 | 第51页 |
| 7.Western Blot检测全反式维甲酸诱导HSC,CMP,GMP和CD34+细胞分化的相关基因表达 | 第51-52页 |
| 8.细胞免疫荧光检测MAT1和CAK-RARα通路相关蛋白在分化各阶段的表达 | 第52页 |
| 9.免疫沉淀检测分化各个阶段血细胞CAK-RARα通路蛋白相互关系 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-63页 |
| 1.全反式维甲酸对人CD34+增殖及细胞形态的影响 | 第53-54页 |
| 2.全反式维甲酸对人HSC,CMP和GMP增殖的影响 | 第54-55页 |
| 3.全反式维甲酸对人HSC,CMP和GMP细胞形态的影响 | 第55-56页 |
| 4.CAK-RARα通路相关蛋白在造血干细胞各分化阶段的表达 | 第56-58页 |
| 5.全反式维甲酸对造血干细胞CAK-RARα通路相关蛋白的影响 | 第58-60页 |
| 6.MAT1在分化各阶段造血干细胞的表达 | 第60-61页 |
| 7.全反式维甲酸对造血干细胞分化各阶段MAT1蛋白的影响 | 第61-62页 |
| 8.全反式维甲酸诱导下造血干细胞分化各阶段中CAK-RARα通路蛋白的相互关系 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第三部分 低磷酸化的RARα诱导入骨肉瘤细胞分化及其机制研究 | 第65-81页 |
| ·实验仪器与材料 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| 1.人骨肉瘤细胞培养 | 第66页 |
| ·T和Hela细胞培养 | 第66页 |
| 3.慢病毒法转染将低磷酸化的RARα导入人骨肉瘤细胞 | 第66-67页 |
| 4.RT-PCR骨肉瘤细胞分化标记基因ALP,OPN,OPGmRNA表达水平的变化 | 第67页 |
| 5.基因芯片检测导入低磷酸化的RARα基因谱变化 | 第67页 |
| 6.基因芯片检测维甲酸受体相关通路基因的表达 | 第67-68页 |
| 7.基因芯片检测成骨细胞分化相关通路基因的表达 | 第68页 |
| 8.基因芯片检测细胞因子基因的表达 | 第68页 |
| 9.RT-PCR检测筛选出的基因芯片中变化基因的表达 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-78页 |
| 1.U2OS细胞的转染效率及流式分选结果 | 第68-69页 |
| 2.低磷酸化维甲酸受体RARα对人骨肉瘤细胞增殖的影响 | 第69-71页 |
| 3.RARαS77A的过表达对入骨肉瘤细胞分化标记物的影响 | 第71页 |
| 4.RARαS77A的过表达对人骨肉瘤细胞CDK7和p27的影响 | 第71-72页 |
| 5.基因芯片检测外源性RARαS77A诱导的基因表达谱变化 | 第72-73页 |
| 6.基因芯片检测外源性RARαS77A对维甲酸受体通路基因的影响 | 第73-75页 |
| 7.基因芯片检测外源性RARαS77A对成骨细胞分化相关通路基因的影响 | 第75-76页 |
| 8.基因芯片检测外源性RARαS77A对细胞因子基因的表达 | 第76-77页 |
| 9.选择差异基因进行RT-PCR验证 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| 第四部分 低磷酸化的RARα诱导人造血干细胞分化及其机制研究 | 第81-88页 |
| ·实验仪器与材料 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-83页 |
| 1.CD34+细胞的分选 | 第82页 |
| 2.慢病毒法转染将低磷酸化的RARα转染人CD34+细胞 | 第82页 |
| 3.琼脂糖集落形成实验检外源性RARαS77A对人CD34+细胞集落形成的影响 | 第82页 |
| 4.台盼蓝拒染法检测外源性低磷酸化的RARα对人CD34+细胞的增殖活性 | 第82页 |
| 5.吉姆萨染色检测外源性低磷酸化的RARα对人CD34+细胞形态的影响 | 第82-83页 |
| 6.RT-PCR检测外源性低磷酸化的RARα诱导人CD34+细胞分化的相关基因情况 | 第83页 |
| ·实验结果 | 第83-86页 |
| 1.CD34+细胞的转染效率及转染后集落的生成情况 | 第83-84页 |
| 2.低磷酸化维甲酸受体RARα对人CD34+细胞增殖和粒性分化的影响 | 第84-86页 |
| 3.外源性RARαS77A对造血干细胞p21表达的影响 | 第86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 第五部分 维甲酸诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡机制研究 | 第88-95页 |
| ·实验仪器与材料 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89页 |
| 1.人急性淋巴性白血病细胞培养 | 第89页 |
| 2.台盼蓝拒染法检测维甲酸抑制人急性淋巴性白血病细胞增殖活性 | 第89页 |
| 3.流式细胞术分析ATRA诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡 | 第89页 |
| 4.Western Blot检测ATRA诱导细胞凋亡相关蛋白表达情况 | 第89页 |
| 5.RT-PCR和Western Blot检测ATRA诱导急性人T淋巴细胞白血病细胞凋过程中RARα和P21的表达 | 第89页 |
| ·实验结果 | 第89-93页 |
| 1.ATRA对人急性淋巴性白血病增殖的影响 | 第89-90页 |
| 2.通过流式细胞术检测ATRA诱导人急性淋巴性白血病细胞凋亡的情况 | 第90-91页 |
| 3.ATRA通过Caspase通路引起人急性淋巴性白血病细胞凋亡 | 第91-92页 |
| 4.ATRA对人急性淋巴性白血病细胞RARα和P21的影响 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 综述 | 第100-113页 |
| 作者简介及在读期间所取得的科研成果 | 第113-114页 |
