氢键对超嗜热酶APE1547稳定性的影响
| 提要 | 第1-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| ·嗜热酶 | 第10-16页 |
| ·嗜热酶的结构特征 | 第10页 |
| ·影响嗜热酶稳定性的因素 | 第10-16页 |
| ·蛋白的稳定性研究 | 第16-20页 |
| ·稳定性类型 | 第16-18页 |
| ·蛋白稳定性研究方法 | 第18-19页 |
| ·蛋白稳定性分析技术 | 第19-20页 |
| ·超嗜热酶APE1547 | 第20-22页 |
| ·超嗜热酶APE1547 简介 | 第20页 |
| ·超嗜热酶APE1547 的结构特征 | 第20-21页 |
| ·超嗜热酶APE1547 的催化机制 | 第21-22页 |
| ·研究背景与设计思路 | 第22-25页 |
| ·研究背景 | 第22页 |
| ·设计思路 | 第22-23页 |
| ·实验方案 | 第23-24页 |
| ·研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 超嗜热酶APE1547 突变体的构建 | 第25-33页 |
| ·引言 | 第25-26页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·溶液配制 | 第26-27页 |
| ·培养基配制 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·突变位点选择 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·突变模板的获得 | 第28页 |
| ·PCR方法扩增突变体基因 | 第28-29页 |
| ·Dpn I限制性内切酶的酶切反应 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶中回收DNA | 第29页 |
| ·感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·全质粒PCR扩增产物的转化 | 第30页 |
| ·单克隆菌株的筛选和鉴定 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-32页 |
| ·全质粒PCR扩增突变质粒 | 第31页 |
| ·突变位点分析 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章 APE1547 及其突变体酶的表达与纯化 | 第33-38页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·实验试剂 | 第33页 |
| ·实验菌株 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·酶的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-37页 |
| ·酶的分离纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第四章 酶学性质与结构研究 | 第38-48页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·酯酶的活力测定 | 第38-39页 |
| ·温度对酶活力的影响 | 第39页 |
| ·pH值对酶活力的影响 | 第39页 |
| ·酯酶的底物特异性测定 | 第39页 |
| ·动力学测定 | 第39页 |
| ·荧光光谱的测定 | 第39-40页 |
| ·圆二色光谱的测定 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-47页 |
| ·突变体酶的相对酶活力测定 | 第40页 |
| ·温度对野生型和突变体酶催化活性的影响 | 第40-41页 |
| ·pH对野生型和突变体酶催化活性的影响 | 第41-42页 |
| ·野生型和突变体酶的底物特异性测定 | 第42-43页 |
| ·动力学参数的测定 | 第43页 |
| ·荧光光谱研究酶的三级结构变化 | 第43-45页 |
| ·CD光谱检测酶结构的变化 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第五章 酶的稳定性研究 | 第48-60页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·热稳定性测定 | 第48-49页 |
| ·变性剂对酶稳定性的影响 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-58页 |
| ·酶的热稳定性研究 | 第50-54页 |
| ·变性剂对酶稳定性的影响 | 第54-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 中文摘要 | 第68-71页 |
| Abstract | 第71-73页 |
