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砷抗性全细胞传感器的构建与检测

中文摘要第1-6页
ABSTRACT第6-12页
第一章 绪论第12-34页
 1 微生物细胞传感器第12-18页
   ·微生物细胞传感器的结构第12-14页
   ·微生物细胞传感器的类型第14-15页
     ·非特异性微生物细胞传感器第14页
     ·半特异性微生物细胞传感器第14-15页
     ·特异性微生物细胞传感器第15页
   ·微生物细胞传感器的构建第15-18页
     ·调节基因/启动子第15-16页
     ·报告基因第16-17页
     ·调控报告基因表达的机制第17-18页
   ·中国在微生物细胞传感器领域的研究进展第18页
 2 启动子第18-31页
   ·启动子的特征第19-24页
     ·启动子的发现第19页
     ·启动子的概念第19页
     ·启动子的结构特征第19页
     ·原核生物启动子的结构第19-21页
     ·启动子的两种突变第21-22页
     ·真核生物启动子的结构第22-24页
       ·RNA 聚合酶 I 的启动子结构第22页
       ·RNA 聚合酶Ⅱ的启动子结构第22-23页
       ·RNA 聚合酶Ⅲ的下游启动子第23-24页
   ·启动子的分类第24-26页
     ·组成型、诱导型和组织特异性启动子第24-25页
     ·双向启动子、可变启动子和串联启动子第25-26页
   ·启动子的作用机制第26页
   ·启动子功能和结构研究的策略第26-27页
     ·转化分析第26-27页
     ·瞬间表达分析第27页
     ·点突变分析第27页
   ·启动子克隆的方法第27-29页
     ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子第27-28页
     ·利用PCR 技术克隆启动子第28页
     ·反向PCR 技术(Inverse-PCR)克隆启动子第28-29页
   ·启动子在环境中的应用第29-31页
     ·微生物传感器对环境污染物的检测第30-31页
     ·污染环境的植物修复第31页
 3 项目的立题背景和研究意义第31-34页
第二章 砷全细胞传感器的构建及表达第34-54页
 1 前言第34-35页
 2 材料、试剂与仪器第35-41页
   ·实验材料第35-36页
     ·菌株和质粒第35页
     ·培养基与溶液的配置第35-36页
     ·引物第36页
   ·实验试剂第36-40页
     ·E.Z.N.A.Gel Extraction Kit第36-38页
     ·E.Z.N.A.Cycle-Pure Kit第38-39页
     ·B 型质粒小样快速提取试剂盒第39-40页
     ·萤光素酶检测系统第40页
     ·琼脂糖凝胶电泳第40页
   ·实验仪器第40-41页
 3 实验方法第41-49页
   ·pUC18-Luc 基础细胞传感器的构建与表达第41-48页
     ·T7 启动子和luc 连接第43-44页
     ·pUC18 和Luc- T7 启动子的连接第44-46页
     ·PCR 方法去除pUC18 上Lac 基因的片段并与Luc-T7P 的连接第46页
     ·pUC18(-Lac)-Luc-T7P 与T7 终止子的连接第46-47页
     ·pUC18-Luc 表达验证第47-48页
   ·砷抗性全细胞传感器的构建第48-49页
     ·砷抗性全细胞传感器pUC18-Luc-arsR 的构建第48页
     ·砷抗性全细胞传感器诱导、表达第48-49页
   ·工程菌 pUC18-Luc-arsR 的遗传稳定性测定第49页
 4 结果与分析第49-53页
   ·pUC18-Luc 构建的电泳结果第49-51页
   ·pUC18-Luc 全细胞传感器诱导 Luc 表达结果第51-52页
   ·砷抗性全细胞传感器(pUC18-Luc-arsR)构建的电泳结果第52页
   ·砷抗性全细胞传感器诱导 Luc 的表达第52-53页
   ·工程菌 pUC18-Luc-arsR 的遗传稳定性第53页
 5 小结第53-54页
第三章 工程菌株检测重金属砷的研究第54-70页
 1 引言第54页
 2 主要试剂第54-55页
 3 实验方法第55-58页
   ·耐受性检测第55页
   ·诱导时间单因素对荧光表达强度影响第55-56页
   ·浓度与诱导时间双因素对荧光表达强度的影响第56页
   ·砷抗性全细胞传感器特异性的测定第56页
   ·扫描电镜与能谱第56-57页
   ·HLPC-ICP-MS 测细胞内不同形态砷的含量第57-58页
   ·砷抗性全细胞传感器的改进第58页
 4 结果第58-69页
   ·耐受性检测第58-60页
   ·诱导时间单因素对荧光表达强度影响第60-61页
   ·浓度与诱导时间双因素对荧光表达强度的影响第61页
   ·砷抗性全细胞传感器特异性的测定第61-62页
   ·扫描电镜与能谱第62-64页
   ·HLPC-ICP-MS 测细胞内不同形态砷的含量第64-68页
   ·砷抗性全细胞传感器的改进第68-69页
 5 小结第69-70页
第四章 结论与展望第70-71页
参考文献第71-78页
附录1 我国生物传感器一览表第78-81页
致谢第81页

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