| 摘要 | 第1-9页 |
| Summary | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 细胞信号传导 | 第14-15页 |
| ·植物细胞信号传导 | 第14页 |
| ·植物蛋白激酶与信号传导 | 第14-15页 |
| 2 植物中的MAPKs | 第15-26页 |
| ·MAPK 级联系统 | 第15-17页 |
| ·植物MAPK 级联系统的组成 | 第15-16页 |
| ·植物MAPK 级联系统信号传递的特异性 | 第16-17页 |
| ·植物中MAPKs 的结构特点 | 第17页 |
| ·植物中MAPKs 的分类 | 第17-20页 |
| ·植物中MAPKs 的功能 | 第20-26页 |
| ·MAPKs 与植物生长发育 | 第20-21页 |
| ·MAPKs 与植物激素信号传递 | 第21-22页 |
| ·MAPKs 与干旱、高盐和低温胁迫信号传递 | 第22-23页 |
| ·MAPKs 与活性氧 | 第23-24页 |
| ·MAPKs 与植物病原信号传递 | 第24-26页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第26-28页 |
| 第二章 实验部分 | 第28-72页 |
| 1 实验材料 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28-29页 |
| ·酶及生化试剂 | 第29页 |
| ·PCR 引物 | 第29-30页 |
| ·培养基见附录 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-50页 |
| ·棉花的培养与处理 | 第30页 |
| ·拟南芥的种植 | 第30-31页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第31页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第31-32页 |
| ·RNA 中基因组DNA 的去除 | 第32页 |
| ·RNA 反转录 | 第32页 |
| ·cDNA 回收纯化（用于5′RACE） | 第32-33页 |
| ·cDNA 的末端加尾反应（用于5′RACE） | 第33页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第33-35页 |
| ·利用简并引物进行PCR 扩增以获得中间片段 | 第33-34页 |
| ·5′ RACE 获得5′端序列 | 第34页 |
| ·3′ RACE 获得3′端序列 | 第34-35页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第35页 |
| ·植物基因组DNA 的提取 | 第35-37页 |
| ·CTAB 法提取基因组DNA | 第35-36页 |
| ·植物基因组DNA 的纯化 | 第36页 |
| ·小量法提取基因组DNA | 第36-37页 |
| ·GhMPK16 全长基因组序列的获得 | 第37页 |
| ·DNA 目的片段的回收 | 第37-38页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的提取 | 第39-41页 |
| ·大量法提取质粒DNA | 第39-40页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第40-41页 |
| ·DNA 序列测定 | 第41页 |
| ·Southern 杂交 | 第41-42页 |
| ·限制性内切酶消化和琼脂糖电泳 | 第41页 |
| ·转膜及烘膜 | 第41-42页 |
| ·探针合成 | 第42页 |
| ·预杂交及杂交 | 第42页 |
| ·Northern 杂交 | 第42-43页 |
| ·RNA 的琼脂糖甲醛变性电泳 | 第42-43页 |
| ·转膜及烘膜 | 第43页 |
| ·探针的合成 | 第43页 |
| ·预杂交及杂交 | 第43页 |
| ·基因枪基因瞬时表达 | 第43-45页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达的载体制备 | 第43-44页 |
| ·基因枪微弹的准备 | 第44页 |
| ·基因枪转化 | 第44-45页 |
| ·植物表达载体的构建、转化及转化植株鉴定 | 第45-48页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第46页 |
| ·农杆菌的培养 | 第46页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第46-47页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第47-48页 |
| ·转基因植株的真菌抗性实验 | 第48-49页 |
| ·PDA 培养基的配制 | 第48页 |
| ·病原真菌的培养 | 第48页 |
| ·病原物接种实验 | 第48页 |
| ·转基因植株抗病性数据统计 | 第48-49页 |
| ·抗病相关基因半定量RT-PCR 分析 | 第49页 |
| ·模拟干旱甘露醇处理拟南芥的实验 | 第49页 |
| ·网络资源及数据库 | 第49-50页 |
| ·生物学软件 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-68页 |
| ·棉花GhMPK16 基因的分离 | 第50-52页 |
| ·棉花RNA 的提取及反转录 | 第50页 |
| ·GhMPK16 中间片段的分离 | 第50-51页 |
| ·GhMPK16 5′片段的分离 | 第51页 |
| ·GhMPK16 3′片段的分离 | 第51页 |
| ·GhMPK16 全长cDNA 的分离 | 第51-52页 |
| ·GhMPK16 的序列分析 | 第52-58页 |
| ·GhMPK16 的全长cDNA 序列分析 | 第52-54页 |
| ·GhMPK16 编码蛋白序列分析 | 第54-57页 |
| ·GhMPK16 基因组序列分析 | 第57-58页 |
| ·GhMPK16 在棉花基因组中的拷贝数分析 | 第58页 |
| ·GhMPK16 的亚细胞定位分析 | 第58-59页 |
| ·GhMPK16 的表达特性分析 | 第59-62页 |
| ·非生物胁迫下GhMPK16 mRNA 水平的变化 | 第59-60页 |
| ·信号分子对GhMPK16 m RNA 水平的影响 | 第60-61页 |
| ·生物胁迫对GhMPK16 m RNA 的影响 | 第61-62页 |
| ·GhMPK16 基因在拟南芥中超表达及转基因拟南芥的功能分析 | 第62-68页 |
| ·植物表达载体的构建及鉴定 | 第62-63页 |
| ·超表达GhMPK16 转基因拟南芥的获得 | 第63-64页 |
| ·超表达GhMPK16 转基因拟南芥的抗病性分析 | 第64-66页 |
| ·超表达GhMPK16 转基因拟南芥在干旱和模拟干旱胁迫下的表型分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| ·GhMPK16 属于D 组MAPK 家族 | 第68-69页 |
| ·GhMPK16 与同源基因的基因组结构比较分析 | 第69页 |
| ·GhMPK16 定位于细胞核中 | 第69-70页 |
| ·GhMPK16 基因在多种诱导条件下的表达特征 | 第70页 |
| ·GhMPK16 基因超表达提高了转基因拟南芥的抗病性 | 第70-71页 |
| ·GhMPK16 基因超表达转基因拟南芥对干旱敏感性增加 | 第71-72页 |
| 第三章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 1 常用培养基 | 第78-79页 |
| 2 常用缓冲液 | 第79-80页 |
| 3 分子杂交试剂 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
