| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-10页 |
| 实验流程图 | 第10-19页 |
| CNE1、CNE2放射生物学测定和放射线照射前后SOD2表达水平 | 第10-11页 |
| SOD2 MicroRNA质粒的构建和有效质粒筛选 | 第11-12页 |
| SOD2 MicroRNA质粒对CNE1细胞放射生物性影响 | 第12-13页 |
| 转染SOD2 miRNA质粒促进x-线对CNE1细胞的杀伤作用 | 第13-19页 |
| 1 前言 | 第19-23页 |
| 2 鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放射敏感性比较 | 第23-29页 |
| ·导言 | 第23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| 细胞株和培养条件 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-24页 |
| ·成克隆实验 | 第23-24页 |
| 辐射剂量和细胞分组 | 第23页 |
| 剂量存活曲线的描绘 | 第23-24页 |
| ·照射方法及条件 | 第24页 |
| ·统计学处理 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-25页 |
| ·不同放射剂量照射CNE1、CNE2细胞的存活率 | 第24页 |
| ·CNE1、CNE2细胞剂量存活曲线及其生物学参数 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-29页 |
| 3 SOD2活性与鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放射抵抗性 | 第29-35页 |
| ·导言 | 第29页 |
| ·材料 | 第29页 |
| 细胞株和培养条件 | 第29页 |
| 主要试剂 | 第29页 |
| 主要仪器 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·制备样本和工作用液 | 第29-30页 |
| 制备工作液和样检液 | 第30页 |
| ·检测步骤 | 第30页 |
| ·SOD活性计算 | 第30-31页 |
| ·统计学处理 | 第31页 |
| 统计学处理 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-32页 |
| ·CNE1和CNE2细胞样品四氮唑实验光吸收值 | 第31-32页 |
| ·CNE1和CNE2细胞的SOD和SOD2活性值 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-35页 |
| 4 SOD2基因表达与鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放射敏感性 | 第35-41页 |
| ·导言 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| 细胞和培养条件 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·样品准备 | 第35页 |
| ·细胞蛋白提取和浓度测定 | 第35-36页 |
| 细胞蛋白提取 | 第35-36页 |
| 提取蛋白浓度测定 | 第36页 |
| ·蛋白电泳、转印和显色 | 第36页 |
| 统计学处理 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-38页 |
| ·SOD2基因在CNE1和CNE2细胞中的表达 | 第37页 |
| ·不同放射剂量和放射后不同时间SOD2在CNE1和CNE2细胞的表达 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| 5 构建沉默SOD2基因的miRNA质粒载体和瞬时转染鼻咽癌细胞 | 第41-61页 |
| ·导言 | 第41页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| 细胞及培养条件 | 第41页 |
| 质粒和细菌 | 第41页 |
| 质粒插入DNA片段 | 第41页 |
| SOD2基因的RT-PCR引物 | 第41-42页 |
| 主要试剂 | 第42页 |
| 主要仪器及设备 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-51页 |
| ·沉默SOD2基因表达的miRNA质粒载体构建 | 第43-47页 |
| 设计质粒插入DNA片段(miRNA前体序列) | 第43-44页 |
| 构建包含SOD2的pre-miRNA的质粒载体 | 第44-47页 |
| ·质粒瞬时转染CNE1细胞 | 第47-48页 |
| ·质粒瞬时转染效应初筛 | 第48-51页 |
| ·统计学处理 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-56页 |
| ·靶向SOD2基因的miRNA质粒的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| ·细胞生长情况观察 | 第52-54页 |
| ·RT-PCR实验观测miR-SOD2对CNE1细胞SOD2的mRNA表达水平的影响 | 第54页 |
| ·Western Blot实验观测miR-SOD2对CNE1细胞SOD2蛋白表达水平的影响 | 第54-55页 |
| ·CCK-8实验观测质粒对CNE1细胞细胞增殖的影响 | 第55-56页 |
| ·流式细胞术(FCM)观测miR-SOD2质粒对细胞周期的影响 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-61页 |
| 6 建立沉默SOD2基因表达的CNE1细胞株 | 第61-69页 |
| ·导言 | 第61页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| 细胞及培养条件 | 第61页 |
| 筛选药物 | 第61页 |
| 引物 | 第61页 |
| 主要试剂 | 第61-62页 |
| 主要仪器及设备 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-66页 |
| ·确定筛选药物浓度 | 第62页 |
| ·筛选稳定转染的CNE1细胞 | 第62-63页 |
| ·扩增稳转CNE1细胞 | 第63页 |
| ·观测稳转CNE1细胞的SOD2表达 | 第63-66页 |
| 观测稳转CNE1细胞中SOD2的mRNA变化 | 第63-65页 |
| 观测稳转CNE1细胞中SOD2的蛋白变化 | 第65-66页 |
| ·统计学处理 | 第66页 |
| 统计学处理 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-67页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第66页 |
| ·Western blot检测结果 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 7 沉默SOD2表达能降低鼻咽癌细胞株CNE1的放射抵抗性 | 第69-75页 |
| ·导言 | 第69页 |
| ·材料 | 第69页 |
| 细胞及培养条件 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-70页 |
| ·成克隆实验 | 第69-70页 |
| ·照射方法及条件 | 第70页 |
| ·统计学处理 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-72页 |
| ·不同放射剂量照射CNE1、稳转miR-SOD2~(700)和稳转miR-neg细胞的存活率 | 第70-71页 |
| ·CNE1、稳转miR-neg、稳转miR-SOD2~(700)细胞剂量存活曲线及其生物学参数 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 8 沉默SOD2促进x-线杀伤鼻咽癌CNE1细胞 | 第75-79页 |
| ·导言 | 第75页 |
| ·材料 | 第75页 |
| 细胞及培养条件 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-76页 |
| ·成克隆实验 | 第75-76页 |
| ·照射方法及条件 | 第76页 |
| ·统计学处理 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-77页 |
| ·不同放射剂量照射CNE1、转染miR-SOD2~(700)和染转miR-neg细胞的存活率 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 9 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 综述 鼻咽癌放疗与SOD2基因和miRNA技术 | 第87-103页 |
| 背景 | 第87页 |
| 鼻咽癌放射治疗现状 | 第87-89页 |
| SOD2基因表达与放疗抵抗性 | 第89-91页 |
| miRNA干扰技术 | 第91-95页 |
| 参考文献 | 第95-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 攻读学位发表论文 | 第105页 |
