| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-25页 |
| ·材料 | 第13-17页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·溶液配制 | 第14-17页 |
| ·方法 | 第17-25页 |
| ·PTP-PEST真核表达质粒构建 | 第17-19页 |
| ·PCR扩增PTP-PEST编码区全长 | 第17页 |
| ·小量制备真核表达载体pcDNA3.1(-) | 第17页 |
| ·PCR产物和pcDNA3.1(-)载体酶切及片段回收 | 第17-18页 |
| ·质粒构建、筛选和鉴定 | 第18-19页 |
| ·建立PTP-PEST表达稳定上调的HepG2细胞株 | 第19-20页 |
| ·质粒转染 | 第19页 |
| ·细胞常规培养 | 第19页 |
| ·转染前准备 | 第19-20页 |
| ·转染 | 第20页 |
| ·阳性转染细胞克隆筛选和单克隆扩增 | 第20页 |
| ·高表达HepG2细胞株的鉴定 | 第20-23页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·细胞总RNA浓度测定及质量鉴定 | 第21页 |
| ·cDNA合成 | 第21页 |
| ·常规PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量PCR分析PTP-PEST mRNA表达 | 第22页 |
| ·western blot检测PTP-PEST蛋白表达水平 | 第22-23页 |
| ·裂解细胞,制备蛋白电泳样品 | 第22页 |
| ·Western Blot | 第22-23页 |
| ·细胞体外增殖MTT法分析 | 第23页 |
| ·接种细胞 | 第23页 |
| ·细胞培养 | 第23页 |
| ·呈色 | 第23页 |
| ·读取吸光值 | 第23页 |
| ·绘制生长曲线 | 第23页 |
| ·Real-Time PCR检测Ras、Grb2、PSTPIP表达量 | 第23-24页 |
| ·Western Blot检测Grb2蛋白表达量 | 第24页 |
| ·统计学处理 | 第24-25页 |
| 第三章 结果 | 第25-37页 |
| ·PcDNA3.1/PTP-PEST真核表达质粒构建 | 第25-29页 |
| ·PTP-PEST全长克隆定 | 第25页 |
| ·PTP-PEST真核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第26页 |
| ·重组质粒的测序验证 | 第26-29页 |
| ·不同细胞株RNA抽提 | 第29页 |
| ·PTP-PEST mRNA水平半定量PCR法分析 | 第29-30页 |
| ·PTP-PEST mRNA表达含量荧光定量PCR法检测 | 第30-31页 |
| ·PTP-PEST蛋白表达Western Blot法分析 | 第31页 |
| ·细胞体外增殖检测 | 第31-32页 |
| ·荧光定量检测Ras、Grb2、PSTPIP表达量 | 第32-36页 |
| ·Western Blot检测Grb2蛋白表达量 | 第36-37页 |
| 第四章 讨论 | 第37-43页 |
| 1. PTP-PEST的结构及高表达HepG2细胞株的建立 | 第37-38页 |
| 2. PTP-PEST在HepG2肝癌细胞中的作用研究 | 第38-43页 |
| 第五章 结论 | 第43-44页 |
| 第六章 参考文献 | 第44-51页 |
| 第七章 综述 | 第51-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 在攻读硕士学位期间的研究成果 | 第63页 |
