| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-25页 |
| 第一部分 MICRORNA在缺血再灌注致急性肾损伤动物模型中的表达谱研究 | 第25-66页 |
| 1.引言 | 第25-26页 |
| 2.材料和方法 | 第26-40页 |
| 2.1 实验对象 | 第26页 |
| 2.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.3 主要仪器 | 第27-29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.4.1 动物模型的饲养与分组 | 第29-30页 |
| 2.4.2 动物模型的构建与处理 | 第30页 |
| 2.4.3 标本收集 | 第30-31页 |
| 2.4.4 血生化检测 | 第31页 |
| 2.4.5 病理染色 | 第31-32页 |
| 2.4.5.1 石蜡包埋 | 第31页 |
| 2.4.5.2 HE染色 | 第31-32页 |
| 2.4.5.3 病理评分 | 第32页 |
| 2.4.6 Microarray检测肾组织及尿液microRNA表达谱 | 第32-35页 |
| 2.4.6.1 总RNA提取及质检 | 第32-33页 |
| 2.4.6.2 RNA加 poly(A)Tailing | 第33-34页 |
| 2.4.6.3 Flash Tag Biotin HSR Ligation | 第34页 |
| 2.4.6.4 芯片杂交 | 第34-35页 |
| 2.4.7 实时定量PCR验证microRNA表达 | 第35-38页 |
| 2.4.8 ELISA法检测尿液NGAL,KIM-1 蛋白浓度 | 第38页 |
| 2.4.9 TUNEL染色检测肾组织凋亡 | 第38-39页 |
| 2.5 数据统计分析处理 | 第39-40页 |
| 3.结果 | 第40-62页 |
| 3.1 大鼠动物模型构建成功 | 第40-43页 |
| 3.1.1 缺血再灌注术后大鼠肾功能水平显著下降 | 第40-41页 |
| 3.1.2 缺血再灌注术后大鼠肾组织损伤明显 | 第41-43页 |
| 3.2 缺血再灌注术后大鼠尿液及肾皮质中MIRNA谱学变化 | 第43-56页 |
| 3.2.1 缺血再灌注动物模型尿液中miRNA谱学变化 | 第43-52页 |
| 3.2.2 缺血再灌注动物模型肾皮质中miRNA谱学变化 | 第52-56页 |
| 3.3 动物模型尿液中表达谱芯片数据的验证 | 第56-57页 |
| 3.4 动物模型肾皮质中表达谱芯片数据的验证 | 第57-60页 |
| 3.5 大鼠尿液中NGAL及 KIM-1 的表达水平 | 第60页 |
| 3.6 动物模型中可检测到显著的凋亡水平 | 第60-62页 |
| 4.讨论 | 第62-66页 |
| 第二部分 MICRORNA-30C-5P对心脏外科手术合并AKI患者中诊断价值的研究 | 第66-84页 |
| 1.引言 | 第66-67页 |
| 2.材料与方法 | 第67-72页 |
| 2.1 研究对象 | 第67-68页 |
| 2.2 主要试剂 | 第68页 |
| 2.3 主要仪器 | 第68-69页 |
| 2.4 实验方法 | 第69-72页 |
| 2.4.1 患者血清肌酐及尿素氮检测 | 第69页 |
| 2.4.2 尿液中总RNA的提取 | 第69-70页 |
| 2.4.3 尿液总RNA反转录及实时定量 | 第70-72页 |
| 2.4.4 ELISA检测AKI患者尿液NGAL及 KIM-1 水平 | 第72页 |
| 2.4.5 数据分析 | 第72页 |
| 3.结果 | 第72-80页 |
| 3.1 基本临床资料 | 第72-75页 |
| 3.2 心脏外科患者尿液中候选MIRNAS的表达水平 | 第75-76页 |
| 3.3 MICRORNA-30C-5P及 MICRORNA-192-5P在AKI各等级患者中的表达水平 | 第76-77页 |
| 3.4 心脏外科术后患者尿液中NGAL及 KIM-1 的表达水平 | 第77-78页 |
| 3.5 候选MIRNAS、NGAL和 KIM-1 之间的诊断效能比较 | 第78-79页 |
| 3.6 尿液中MICRORNA-30C-5P及 MICRORNA-192-5P的来源探究 | 第79-80页 |
| 4.讨论 | 第80-84页 |
| 第三部分 低氧-复氧模型中MICRORNA-30C-5P的功能分析及对SOCS3 的调控机制研究 | 第84-126页 |
| 1.引言 | 第84-85页 |
| 2.方法与材料 | 第85-104页 |
| 2.1 实验对象 | 第85页 |
| 2.2 主要试剂 | 第85-87页 |
| 2.3 主要仪器 | 第87-88页 |
| 2.4 实验方法 | 第88-104页 |
| 2.4.1 HIF1α及 SOCS3 过表达质粒图谱 | 第88-89页 |
| 2.4.2 shRNA质粒构建及稳转株构建 | 第89-96页 |
| 2.4.3 shRNA质粒图谱 | 第96-97页 |
| 2.4.4 细胞培养及低氧-复氧模型的建立分组与转染 | 第97-98页 |
| 2.4.5 Western Blot检测样本目的蛋白水平 | 第98-101页 |
| 2.4.6 原位杂交法检测microRNA-30c-5p的表达 | 第101-102页 |
| 2.4.7 AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡(流式细胞术) | 第102页 |
| 2.4.8 CCK8 检测细胞增殖情况 | 第102页 |
| 2.4.9 实时定量PCR检测细胞模型中miRNAs的表达水平 | 第102-103页 |
| 2.4.10 TUNEL检测细胞凋亡 | 第103页 |
| 2.4.11 双荧光素酶报告基因验证microRNA-30c-5p对 SOCS3 的靶向作用 | 第103-104页 |
| 3.结果 | 第104-122页 |
| 3.1 MICRORNA-30C-5P在缺血再灌注后大鼠模型的小管间质中表达水平 | 第104-106页 |
| 3.2 MICRORNA-30C-5P在低氧-复氧细胞模型中表达水平 | 第106页 |
| 3.3 OLIGO转染效率 | 第106-107页 |
| 3.4 体外调节MICRORNA-30C-5P表达对低氧-复氧模型中凋亡的影响Ⅰ | 第107-108页 |
| 3.5 体外调节MICRORNA-30C-5P表达对低氧-复氧模型中凋亡的影响Ⅱ | 第108-109页 |
| 3.6 体外调节MICRORNA-30C-5P表达对低氧-复氧模型中凋亡及增殖相关蛋白的影响 | 第109-110页 |
| 3.7 体外调节MICRORNA-30C-5P表达对低氧-复氧模型中细胞增殖水平的影响 | 第110-111页 |
| 3.8 上调MICRORNA-30C-5P表达对低氧诱导因子1Α(HIF1Α)的影响 | 第111-112页 |
| 3.9 干扰HIF1Α表达对MICRORNA-30C-5P上调组中细胞凋亡的影响Ⅰ | 第112-114页 |
| 3.10 干扰HIF1Α表达对MICRORNA-30C-5P上调组中细胞凋亡的影响Ⅱ | 第114-116页 |
| 3.11 干扰HIF1Α的表达对MICRORNA-30C-5P上调组中凋亡蛋白的影响 | 第116-117页 |
| 3.12 干扰HIF1Α的表达对MICRORNA-30C-5P上调组中细胞增殖的影响 | 第117页 |
| 3.13 MICRORNA-30C-5P靶基因预测及对靶基因细胞因子信号传导抑制蛋白(SOCS3)的鉴定 | 第117-119页 |
| 3.14 体外下调SOCS3 的表达后HIF1Α的蛋白水平增高 | 第119-120页 |
| 3.15 体外上调SOCS3 表达后对细胞凋亡水平的影响 | 第120-121页 |
| 3.16 体外调节SOCS3 表达后低氧细胞模型中凋亡相关蛋白的表达水平 | 第121-122页 |
| 4.讨论 | 第122-126页 |
| 结论 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-136页 |
| 在读期间论文撰写发表及学术会议投稿 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
