| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 顺铂与多药耐药 | 第13-14页 |
| 1.2 依布硒啉 | 第14-17页 |
| 1.2.1 依布硒啉简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 依布硒啉对活性氧的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.3 依布硒啉的药理作用 | 第16-17页 |
| 1.3 PI3K/Akt通路在肿瘤中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4 低氧诱导因子- | 第18-20页 |
| 1.4.1 低氧诱导因子-1的结构与功能 | 第18-19页 |
| 1.4.2 低氧诱导因子-1与肿瘤的关系 | 第19-20页 |
| 1.4.3 HIF-1?的抑制剂2-甲氧基雌二醇 | 第20页 |
| 1.5 科学问题与假设 | 第20-21页 |
| 1.5.1 科学问题 | 第20页 |
| 1.5.2 提出假设 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第21-22页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第22页 |
| 1.7 研究思路与技术路线 | 第22-24页 |
| 1.7.1 研究思路 | 第22-23页 |
| 1.7.2 实验技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 HIF-1?在顺铂诱导A549细胞耐药形成中的作用 | 第24-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 2.1.1 细胞 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.3 实验仪器及设备 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 细胞培养及药物处理 | 第27-28页 |
| 2.2.2 MTT法检测细胞活力 | 第28页 |
| 2.2.3 细胞内氧自由基含量检测 | 第28-29页 |
| 2.2.4 DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平 | 第29-30页 |
| 2.2.5 细胞形态学观察 | 第30页 |
| 2.2.6 细胞划痕实验 | 第30页 |
| 2.2.7 细胞凋亡检测 | 第30-31页 |
| 2.2.8 细胞内P-gp、HIF-1?、Akt、PI3K、E-cadherin、Bax、Bcl-2蛋白的表达检测 | 第31-32页 |
| 2.2.9 雌二醇干扰的方法 | 第32页 |
| 2.2.10 氯化钴诱导低氧模型的方法 | 第32-33页 |
| 2.2.11 数据统计 | 第33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-40页 |
| 2.3.1 顺铂刺激对A549细胞活力的作用 | 第33-34页 |
| 2.3.2 顺铂刺激对A549细胞内SOD活力和MDA水平变化 | 第34页 |
| 2.3.3 顺铂刺激对A549细胞内ROS水平的变化 | 第34-35页 |
| 2.3.4 顺铂刺激对A549细胞形态的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.5 顺铂刺激对A549细胞划痕的影响 | 第36页 |
| 2.3.6 顺铂刺激对A549细胞凋亡的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.7 顺铂刺激对A549细胞HIF-1?、PI3K、Akt、P-gp、E-cadherin、Bax、Bcl-蛋白表达的作用 | 第37-38页 |
| 2.3.8 顺铂刺激A549细胞不同时间P-gp的变化 | 第38-39页 |
| 2.3.9 雌二醇干扰对细胞中HIF-1?、P-gp蛋白表达的作用 | 第39-40页 |
| 2.3.10 不同浓度氯化钴对A549细胞HIF-1?和P-gp表达的影响 | 第40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-44页 |
| 第三章 依布硒啉阻滞由顺铂引起的多药耐药 | 第44-57页 |
| 3.1 实验耗材与实验方法 | 第44-45页 |
| 3.1.1 本章节所用细胞及来源 | 第44页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 实验所用仪器及设备 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 3.2.1 细胞培养及实验分组 | 第45页 |
| 3.2.2 MTT法检测细胞活力 | 第45页 |
| 3.2.3 细胞内GSH-PX活力的检测 | 第45页 |
| 3.2.4 细胞内ROS水平检测 | 第45页 |
| 3.2.5 细胞形态学观察 | 第45页 |
| 3.2.6 划痕实验 | 第45-46页 |
| 3.2.7 凋亡检测 | 第46页 |
| 3.2.8 HIF-1?在细胞内表达与定位 | 第46页 |
| 3.2.9 细胞内HIF-1?、P-gp、E-cadherin、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达检测 | 第46页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-55页 |
| 3.3.1 依布硒啉和顺铂对A549细胞活力的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.2 依布硒啉和顺铂对A549细胞GSH-PX的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.3 依布硒啉与顺铂对A549细胞内ROS水平的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.4 依布硒啉和顺铂对A549细胞形态学的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.5 依布硒啉和顺铂对A549细胞划痕的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.6 依布硒啉和顺铂对A549细胞凋亡的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.7 依布硒啉和顺铂对A549细胞内HIF-1?核转位的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.8 依布硒啉和顺铂对组细胞HIF-1?、P-gp、E-cadherin、Caspase-3、Bcl-2、Ba蛋白表达的作用 | 第53-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 依布硒啉逆转A549/DDP的多药耐药 | 第57-71页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第57-58页 |
| 4.1.1 本章所用细胞株及来源 | 第57页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.3 实验仪器及设备 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 4.2.1 细胞培养及实验分组 | 第58页 |
| 4.2.2 DNA的检测 | 第58-59页 |
| 4.2.3 两种细胞不同药物的MTT法测定IC | 第59页 |
| 4.2.4 通过IC50评价逆转多药耐药结果 | 第59页 |
| 4.2.5 DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平 | 第59页 |
| 4.2.6 细胞形态学观察 | 第59页 |
| 4.2.7 划痕实验 | 第59页 |
| 4.2.8 细胞凋亡检测 | 第59页 |
| 4.2.9 细胞内HIF-1?,P-gp的表达定位检测 | 第59-60页 |
| 4.2.10 siRNA干扰的方法 | 第60页 |
| 4.2.11 细胞内HIF-1?、P-gp蛋白的表达检测 | 第60页 |
| 4.2.12 统计学分析 | 第60页 |
| 4.3 实验结果 | 第60-68页 |
| 4.3.1 DNA的检测 | 第60-61页 |
| 4.3.2 A549细胞与A549/DDP细胞三种药物的半数抑制率药物浓度的影响 | 第61页 |
| 4.3.3 依布硒啉对A549/DDP细胞顺铂IC50浓度的影响的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.4 依布硒啉与顺铂对A549/DDP细胞内ROS水平的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.5 依布硒啉和顺铂对A549/DDP细胞形态学的影响 | 第63页 |
| 4.3.6 依布硒啉和顺铂对A549/DDP细胞划痕的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.7 依布硒啉和顺铂对A549/DDP细胞凋亡的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.8 依布硒啉对A549/DDP细胞HIF-1?核转位的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.9 依布硒啉对A549/DDP细胞P-gp表达的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.10 依布硒啉对A549/DDP细胞HIF-1?、P-gp蛋白表达的作用 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 总结与展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士期间取得的学术成果 | 第80页 |
