| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 硒的概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 硒的生物利用 | 第13-14页 |
| 1.1.2 硒对血管系统的影响 | 第14-15页 |
| 1.2 miRNA概述 | 第15-18页 |
| 1.2.1 miRNA的生产与功能 | 第16页 |
| 1.2.2 miRNA的调控特点 | 第16-17页 |
| 1.2.3 miR-128s研究概况 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞间的连接方式 | 第18-21页 |
| 1.3.1 细胞间的紧密连接 | 第19页 |
| 1.3.2 影响紧密连接的因素 | 第19-21页 |
| 1.4 CADM1概述 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 动物材料 | 第24页 |
| 2.2 试验试剂 | 第24-25页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第25页 |
| 2.4 引物序列 | 第25-26页 |
| 2.5 肉鸡静脉组织结构观察 | 第26-27页 |
| 2.6 缺硒肉鸡静脉miR-128-1-5p表达丰度检测 | 第27-30页 |
| 2.6.1 肉鸡缺硒应答miRNA的筛选 | 第27页 |
| 2.6.2 总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.6.3 mRNA的荧光定量检测 | 第27-28页 |
| 2.6.4 miRNA的荧光定量检测 | 第28-29页 |
| 2.6.5 miR-128-1-5p潜在靶基因的预测 | 第29-30页 |
| 2.7 肉鸡静脉内皮细胞培养及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.7.1 肉鸡静脉内皮细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.7.2 免疫组化鉴定VECs | 第31页 |
| 2.8 体外培养内皮细胞miR-128-1-5p过表达/敲低模型的建立 | 第31-32页 |
| 2.9 miR-128-1-5p靶基因CADM1的鉴定 | 第32-34页 |
| 2.9.1 荧光素酶报告载体的构建与鉴定 | 第32-34页 |
| 2.9.2 重组质粒转染细胞 | 第34页 |
| 2.10 蛋白提取及Westernbloting | 第34-35页 |
| 2.11 细胞周期分析 | 第35页 |
| 2.12 细胞旁路通透性检测 | 第35-36页 |
| 2.12.1 荧光标记葡聚糖法 | 第35-36页 |
| 2.12.2 辣根过氧化物酶法 | 第36页 |
| 2.13 试验数据的统计与分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-50页 |
| 3.1 肉鸡静脉结构观察 | 第37-38页 |
| 3.1.1 肉鸡静脉超微结构观察结果 | 第37-38页 |
| 3.1.2 肉鸡静脉病理结构观察结果 | 第38页 |
| 3.2 肉鸡静脉组织miR-128-1-5p检测 | 第38页 |
| 3.3 VECs培养及鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.1 VECs培养 | 第38-39页 |
| 3.3.2 免疫组化鉴定VECs | 第39-40页 |
| 3.4 VECs转染miR-128-1-5p的干扰效率 | 第40-41页 |
| 3.5 miR-128-1-5p靶基因筛选 | 第41-43页 |
| 3.5.1 miR-128-1-5p靶基因初步筛选 | 第41页 |
| 3.5.2 双荧光素酶活性检测结果 | 第41-43页 |
| 3.5.3 CADM1表达水平 | 第43页 |
| 3.6 miR-128-1-5p介导VECs中紧密连接通路调节 | 第43-45页 |
| 3.6.1 miR-128-1-5p介的VECs紧密连接通路mRNA表达 | 第43-44页 |
| 3.6.2 miR-128-1-5p介导VECs紧密连接通路蛋白表达 | 第44-45页 |
| 3.7 缺硒性肉鸡静脉紧密连接通路关键基因的表达 | 第45-47页 |
| 3.7.1 缺硒性肉鸡静脉紧密连接mRNA表达调节 | 第45-46页 |
| 3.7.2 缺硒性肉鸡静脉紧密连接蛋白表达调节 | 第46-47页 |
| 3.8 miR-128-1-5p介导的细胞旁通透性调控 | 第47-48页 |
| 3.9 miR-128-1-5p介导的细胞周期调控 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 miRNA对硒介导的紧密连接功能影响 | 第51页 |
| 4.2 缺硒性静脉特异性miR-128-1-5p靶向调控CADM1 | 第51-52页 |
| 4.3 缺硒与miR-128-1-5p对VECs屏障功能的影响 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
