摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第1章 绪论 | 第10-19页 |
1.1 食管癌研究现状 | 第10-11页 |
1.2 表观遗传学调控 | 第11-15页 |
1.2.1 表观遗传学概念 | 第11-12页 |
1.2.2 表观遗传学调控方式 | 第12-15页 |
1.3 抑癌基因的甲基化异常与食管癌 | 第15-19页 |
第2章 材料与方法 | 第19-38页 |
2.1 实验材料 | 第19-23页 |
2.1.1 实验细胞 | 第19页 |
2.1.2 临床标本 | 第19-20页 |
2.1.3 主要实验仪器设备 | 第20-21页 |
2.1.4 主要实验试剂 | 第21页 |
2.1.5 常用实验试剂的配制 | 第21-23页 |
2.2 实验方法 | 第23-38页 |
2.2.1 细胞培养 | 第23页 |
2.2.2 全基因组关联性分析(Post hoc GWAS) | 第23-24页 |
2.2.3 甲基化转移酶抑制实验 | 第24页 |
2.2.4 甲基化荧光定量PCR(Real-time Methylation—specific PCR,MSP) | 第24-27页 |
2.2.5 亚硫酸氢钠测序(Bisulfite genomic sequencing-BGS) | 第27-28页 |
2.2.6 Real-time荧光定量PCR | 第28-30页 |
2.2.7 细胞蛋白的提取及定量 | 第30-32页 |
2.2.8 Western Blot | 第32-33页 |
2.2.9 慢病毒包装 | 第33-34页 |
2.2.10 慢病毒感染贴壁细胞 | 第34-35页 |
2.2.11 细胞热休克实验 | 第35页 |
2.2.12 细胞爬片、固定及免疫荧光 | 第35-36页 |
2.2.13 MitoSOXRed实验 | 第36页 |
2.2.14 彗星实验 | 第36-38页 |
第3章 实验结果 | 第38-59页 |
3.1 SLC22A3是家族性食管癌的易感基因 | 第38-43页 |
3.2 人食管癌细胞系中SLC22A3低表达由其启动子DNA甲基化调控 | 第43-44页 |
3.3 BGS确证食管癌细胞系中SLC22A3基因启动子区甲基化异常 | 第44-45页 |
3.4 家族性食管癌癌旁组织中SLC22A3的表达与其启动子甲基化水平呈负相关 | 第45-46页 |
3.5 有家族史食管癌病例SLC22A3启动子甲基化程度高于无家族史病例 | 第46-48页 |
3.6 外周血SLC22A3甲基化增加ESCC高危人群患癌风险:扩展病例对照样本实验 | 第48-51页 |
3.7 构建SLC22A3敲低的正常食管上皮细胞模型 | 第51-53页 |
3.7.1 稳定细胞的转染和克隆筛选 | 第52页 |
3.7.2 NE1和NE3转染后,细胞内SLC22A3表达的检测 | 第52-53页 |
3.8 SLC22A3基因敲低的正常食管上皮细胞热激后细胞内ROS水平升高 | 第53-54页 |
3.9 SLC22A3基因敲低的正常食管上皮细胞热激后产生DNA损伤 | 第54-59页 |
3.9.1 彗星实验检测DNA损伤水平 | 第54-56页 |
3.9.2 免疫荧光实验定量检测DNA损伤标志物γ-H2AX | 第56-58页 |
3.9.3 Western Blot验证DNA损伤标志物γ-H2AX的表达 | 第58-59页 |
第4章 讨论 | 第59-61页 |
第5章 结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-69页 |
附录 | 第69-70页 |
致谢 | 第70-71页 |
攻读硕士期间的研究成果 | 第71页 |