| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 符号与缩略语说明 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-16页 |
| ·原核生物启动子的结构模型 | 第9页 |
| ·启动子的分类 | 第9-10页 |
| ·启动子克隆的意义 | 第10页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第10-12页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第10-11页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌冷激蛋白启动子的研究 | 第12-16页 |
| ·大肠杆菌的冷激蛋白CspA及其家族成员 | 第13页 |
| ·冷激蛋白CspA核心启动子 | 第13-14页 |
| ·冷激蛋白cspA mRNA的5'-UTR | 第14-15页 |
| ·冷激启动子应用研究的意义 | 第15-16页 |
| 2 以绿色荧光蛋白为报告基因的启动子探针载体构建和应用 | 第16-33页 |
| ·材料与试剂 | 第16-18页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·实验用菌株和质粒 | 第17页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·连接产物转化DH5a感受态细胞 | 第19页 |
| ·质粒的提取 | 第19页 |
| ·基因片段琼脂糖凝胶电泳切胶回收 | 第19-20页 |
| ·以绿色荧光蛋白基因为报告基因的启动子探针载体的构建 | 第20-24页 |
| ·启动子探针载体pGFP+RBS探针特性的证实 | 第24-26页 |
| ·筛选出的启动子性质测定 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-30页 |
| ·以绿色荧光蛋白基因为报告基因的启动子探针载体的构建 | 第26-28页 |
| ·pGFP+RBS启动子探针特性的证实 | 第28-29页 |
| ·未知启动子promoterl性质的初步研究 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-33页 |
| ·启动子探针载体pGFP+RBS的优点 | 第30-31页 |
| ·使用启动子探针载体pGFP+RBS筛选启动子的注意点 | 第31-33页 |
| 3 cold启动子的克隆和低温诱导表达载体的构建 | 第33-53页 |
| ·材料与试剂 | 第33-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-42页 |
| ·低温诱导表达载体构建及性质鉴定策略 | 第34-35页 |
| ·cold启动子基因的PCR扩增 | 第35-37页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第37-38页 |
| ·低温诱导表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·低温诱导表达载体pET30a/cold的性质鉴定 | 第39-42页 |
| ·实验结果 | 第42-49页 |
| ·E.coli cspA基因上游启动子序列的扩增 | 第42页 |
| ·cold启动子TA克隆鉴定 | 第42-43页 |
| ·cold启动子序列测序鉴定 | 第43-44页 |
| ·低温诱导表达载体pET30a/cold的构建 | 第44-45页 |
| ·低温诱导表达载体pET30a/cold的应用 | 第45-46页 |
| ·cold启动子介导的低温诱导ADI表达研究 | 第46-49页 |
| ·讨论 | 第49-53页 |
| ·cold启动子结构分析 | 第49-50页 |
| ·低温诱导表达载体应用意义 | 第50-51页 |
| ·cold启动子构建的低温诱导表达载体存在的问题 | 第51-53页 |
| 4 结论与展望 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
