| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 符号及缩略说明表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1 禾谷镰孢菌单端孢霉烯族毒素的研究进展 | 第13-21页 |
| 1.1 禾谷镰孢菌毒素类型 | 第13-18页 |
| 1.1.1 单端孢霉烯族毒素 | 第14-18页 |
| 1.2 单端孢霉烯族毒素的生物合成途径 | 第18-20页 |
| 1.3 单端孢霉烯族毒素降解途径 | 第20-21页 |
| 2 转基因食品的研究现状 | 第21-27页 |
| 2.1 转基因技术 | 第21页 |
| 2.2 转基因食品的发展 | 第21-23页 |
| 2.2.1 国际植物转基因食品的发展 | 第22页 |
| 2.2.2 国内植物转基因食品的发展 | 第22-23页 |
| 2.3 植物转基因常用的目的基因 | 第23-24页 |
| 2.3.1 品质改良基因 | 第23页 |
| 2.3.2 抗除草剂基因 | 第23页 |
| 2.3.3 抗病基因 | 第23-24页 |
| 2.3.4 抗虫基因 | 第24页 |
| 2.4 植物转基因的方法 | 第24-25页 |
| 2.4.1 农杆菌介导法 | 第24页 |
| 2.4.2 基因枪法 | 第24-25页 |
| 2.5 植物转基因食品的优势 | 第25-26页 |
| 2.5.1 减少农药使用,保护环境 | 第25页 |
| 2.5.2 提高产量,降低生产成本,增加农民收入 | 第25页 |
| 2.5.3 改良作物的遗传品质 | 第25-26页 |
| 2.6 植物转基因食品的弊端 | 第26-27页 |
| 2.6.1 毒性问题 | 第26页 |
| 2.6.2 过敏性问题 | 第26页 |
| 2.6.3 抗生素的抗性问题 | 第26-27页 |
| 2.6.4 非预期效应问题 | 第27页 |
| 3 本文研究目的及意义 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-35页 |
| 第二章 hph和Cry1Ac定点插入对禾谷镰孢次生代谢产物DON毒素生物合成的影响研究 | 第35-53页 |
| 1 材料与方法 | 第36-45页 |
| 1.1 供试菌株 | 第36-37页 |
| 1.2 转化片段 | 第37-38页 |
| 1.2.1 潮霉素磷酸转移酶基因(hph) | 第37页 |
| 1.2.2 Bt毒蛋白基因(Cry1Ac) | 第37-38页 |
| 1.3 培养基 | 第38页 |
| 1.4 主要试剂 | 第38页 |
| 1.5 DNA和RNA的提取 | 第38-39页 |
| 1.5.1 禾谷镰孢菌基因组DNA提取(CTAB法) | 第38页 |
| 1.5.2 禾谷镰孢菌基因组RNA提取 | 第38-39页 |
| 1.6 qRT-PCR反应 | 第39-40页 |
| 1.6.1 RNA反转 | 第39页 |
| 1.6.2 qRT-PCR | 第39-40页 |
| 1.7 原生质体转化方法 | 第40-41页 |
| 1.8 hph和Cry1Ac定点插入突变体的获得及验证 | 第41-44页 |
| 1.8.1 载体构建 | 第41-44页 |
| 1.8.2 突变体验证 | 第44页 |
| 1.9 突变体表型测定 | 第44页 |
| 1.10 突变体产DON能力及毒素合成基因表达测定 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 2.1 定点插入突变体验证 | 第45-46页 |
| 2.2 定点插入突变体表型的变化 | 第46页 |
| 2.3 定点插入突变体产DON的能力 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 第三章 hph和Cry1Ac随机插入对禾谷镰孢菌次生代谢产物DON毒素生物合成的影响研究 | 第53-65页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| 1.1 供试菌株 | 第54页 |
| 1.2 转化片段 | 第54页 |
| 1.3 培养基 | 第54页 |
| 1.4 试剂 | 第54-55页 |
| 1.5 DNA和RNA提取 | 第55页 |
| 1.6 qRT-PCR反应 | 第55页 |
| 1.7 原生质体转化方法 | 第55页 |
| 1.8 hph和Cry1Ac随机插入突变体的获得及验证 | 第55-56页 |
| 1.9 突变体毒素合成基因tri5的表达量测定 | 第56页 |
| 1.10 致病力测定 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-60页 |
| 2.1 随机插入突变体验证 | 第56-57页 |
| 2.2 hph随机插入突变体毒素合成基因tri5的表达 | 第57页 |
| 2.3 Cry1Ac随机插入突变体毒素合成基因tri5的表达 | 第57-58页 |
| 2.4 突变体离体毒素验证 | 第58-59页 |
| 2.5 突变体致病力验证 | 第59-60页 |
| 2.6 随机插入突变体毒素合成基因tri5的表达量的概率分布直方图 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 第四章 外源基因随机插入禾谷镰孢菌的位点研究 | 第65-85页 |
| 1 材料与方法 | 第66-72页 |
| 1.1 供试菌株 | 第66页 |
| 1.2 培养基 | 第66页 |
| 1.3 试剂 | 第66页 |
| 1.4 DNA和RNA提取 | 第66-67页 |
| 1.5 qRT-PCR反应 | 第67页 |
| 1.6 原生质体转化方法 | 第67页 |
| 1.7 突变体单拷贝插入验证 | 第67-68页 |
| 1.8 突变体毒素合成基因tri5的表达测定 | 第68页 |
| 1.9 致病力测定 | 第68页 |
| 1.10 Tail-PCR扩增随机插入突变体的hph和Cry1Ac的侧翼序列 | 第68-70页 |
| 1.11 Tail-PCR产物的纯化、测序及比对 | 第70页 |
| 1.12 毒素合成水平验证 | 第70-72页 |
| 1.12.1 载体构建 | 第71-72页 |
| 1.12.2 突变体验证 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-80页 |
| 2.1 外源基因单拷贝插入验证 | 第72-73页 |
| 2.2 Tail-PCR定位hph在F.graminearum中的插入位置 | 第73-75页 |
| 2.3 Tail-PCR定位Cry1Ac在F.graminearum中的插入位置 | 第75-76页 |
| 2.4 hph、neo和Cry1Ac定点插入FGSG_01445和FGSG_05569的突变体验证 | 第76-77页 |
| 2.5 hph、neo和Cry1Ac分别定点插入基因FGSG_01445和FGSG_05569中的突变体的表型测定 | 第77-78页 |
| 2.6 hph、neo和Cry1Ac分别定点插入基因FGSG_01445和FGSG_05569中的突变体产DON能力 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
| 全文小结 | 第85-87页 |
| 附录 | 第87-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
