| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第15-21页 |
| 1.1 维生素B_6简介及其在生物体内的作用 | 第15页 |
| 1.2 维生素B_6的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.3 生物体内维生素B_6的代谢转换 | 第16-18页 |
| 1.4 磷酸酶论述 | 第18-20页 |
| 1.4.1 磷酸酶简介 | 第18页 |
| 1.4.2 PLP磷酸酶研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 RNAi简介 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 2.1 研究背景与意义 | 第21页 |
| 2.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-36页 |
| 3.1 材料、实验设备及主要试剂 | 第22-24页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 3.1.2 主要实验设备 | 第22页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 3.1.4 常用试剂配制(见表3-1) | 第22-24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 3.2.1 序列分析 | 第24页 |
| 3.2.2 烟草磷酸吡哆醛磷酸酶基因克隆 | 第24-26页 |
| 3.2.3 构建原核表达载体 | 第26-29页 |
| 3.2.4 重组蛋白的表达与分析 | 第29-30页 |
| 3.2.5 NtPLPP酶活的测定 | 第30-32页 |
| 3.2.6 NtPLPPRNAi载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.7 农杆菌侵染烟草叶片 | 第33-34页 |
| 3.2.8 荧光定量检测 | 第34-35页 |
| 3.2.9 烟草NtPLPP基因的亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 4 实验结果与分析 | 第36-51页 |
| 4.1 烟草NtPLPP cDNA序列分析 | 第36-38页 |
| 4.2 烟草NtPLPP基因的克隆 | 第38-40页 |
| 4.2.1 烟草NtPLPP cDNA的获得 | 第38-40页 |
| 4.2.2 烟草NtPLPP基因的克隆 | 第40页 |
| 4.3 烟草NtPLPP的原核表达 | 第40-42页 |
| 4.3.1 烟草NtPLPP原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.3.2 NtPLPP的目的蛋白诱导 | 第41-42页 |
| 4.4 蛋白浓度的测定 | 第42页 |
| 4.5 NtPLPP的部分酶学性质分析 | 第42-44页 |
| 4.5.1 最适pH值 | 第42-43页 |
| 4.5.2 酶促反应的最适温度 | 第43页 |
| 4.5.3 酶促反应时间 | 第43页 |
| 4.5.4 对不同底物的催化活性比较 | 第43-44页 |
| 4.6 RNAi载体的构建 | 第44-49页 |
| 4.6.1 沉默片段的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.6.2 反向干扰片段载体构建 | 第45-46页 |
| 4.6.3 正向干扰片段载体构建 | 第46-47页 |
| 4.6.4 内参基因稳定性检测 | 第47页 |
| 4.6.5 烟草NtPLPP的RNAi瞬时沉默效率检测 | 第47-48页 |
| 4.6.6 烟草NtPLPP瞬时沉默后VB_6代谢其他相关基因的变化 | 第48-49页 |
| 4.7 烟草NtPLPP基因亚细胞定位的分析 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| 5.1 NtPLPP的氨基酸序列分析 | 第51-52页 |
| 5.2 烟草磷酸吡哆醛磷酸酶的最适反应条件 | 第52页 |
| 5.3 底物特异性分析 | 第52页 |
| 5.4 NtPLPP基因RNAi效果 | 第52页 |
| 5.5 NtPLPP对其它VB_6代谢相关酶基因表达的影响 | 第52-53页 |
| 5.6 NtPLPP基因的亚细胞定位分析 | 第53-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 6.1 NtPLPP基因的克隆、序列分析 | 第54页 |
| 6.2 酶学性质分析 | 第54页 |
| 6.3 NtPLPPRNAi载体沉默效果以及对代谢相关基因的影响 | 第54页 |
| 6.4 亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
