| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第1章 引言 | 第8-24页 |
| 1.1 EV71的流行病学介绍 | 第8-9页 |
| 1.2 EV71的病毒学特征 | 第9-10页 |
| 1.3 EV71疫苗研究现状 | 第10-12页 |
| 1.4 EV712A蛋白及其功能 | 第12-13页 |
| 1.5 黏膜免疫系统和分泌性sIgA | 第13-15页 |
| 1.6 EV71VP1蛋白和抗体依赖性增强效应 | 第15-17页 |
| 1.7 单克隆抗体技术 | 第17-18页 |
| 1.8 利用抗体类型转换获得产IgA的杂交瘤细胞株 | 第18-20页 |
| 1.9 通透膜系统(Transwell System)模拟体内黏膜系统微环境 | 第20-21页 |
| 1.10 本研究的目的和意义 | 第21-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-46页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第24-30页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验用耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.4 生物材料 | 第27页 |
| 2.1.5 溶液和培养基配方 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 肠道病毒EV71 mRNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 pET-28a-2A和pET-28a-VP1克隆构建 | 第30页 |
| 2.2.3 蛋白的表达纯化及检测 | 第30-32页 |
| 2.2.4 蛋白检测 | 第32-33页 |
| 2.2.5 细胞传代培养冻存和复苏 | 第33-35页 |
| 2.2.6 细胞融合 | 第35-37页 |
| 2.2.7 杂交瘤细胞上清检测(ELISA) | 第37-38页 |
| 2.2.8 融合细胞的单克隆化 | 第38页 |
| 2.2.9 有限稀释法筛选IgA分泌型单克隆杂交瘤细胞株 | 第38-39页 |
| 2.2.10 免疫荧光验证IgG/IgA分泌型单克隆杂交瘤细胞株的特异性 | 第39页 |
| 2.2.11 腹水制备与抗体纯化 | 第39-41页 |
| 2.2.12 Transwell模型培养极化的上皮细胞 | 第41-42页 |
| 2.2.13 Transwell极化细胞的生长和电阻的测定 | 第42页 |
| 2.2.14 Transwell中的抗体效应实验 | 第42-43页 |
| 2.2.15 经典中和实验检测VP1-IgGs的体外中和活性 | 第43页 |
| 2.2.16 THP-1细胞中验证病毒的抗体依赖性增强作用 | 第43-46页 |
| 第3章 实验结果 | 第46-74页 |
| 3.1 EV712A特异性IgA单克隆抗体的制备及其对病毒复制的影响 | 第46-58页 |
| 3.1.1 EV71BrCr株2A蛋白原核表达克隆构建 | 第46-47页 |
| 3.1.2 EV71 2A蛋白的诱导表达纯化和鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.3 EV71 2A特异性杂交瘤细胞的筛选和鉴定 | 第48-51页 |
| 3.1.4 利用竞争性ELISA验证2A蛋白单克隆抗体识别表位 | 第51页 |
| 3.1.5 利用抗体类型转换筛选特异性的产IgA的杂交瘤细胞株 | 第51-52页 |
| 3.1.6 腹水制备与抗体纯化 | 第52-54页 |
| 3.1.7 IgA抗体在Transwell系统中的定向转运 | 第54页 |
| 3.1.8 EV71在Transwell系统中的复制曲线的测定 | 第54-55页 |
| 3.1.9 2A-IgA在Transwell系统中的胞内中和测定 | 第55-56页 |
| 3.1.10 2AIgA胞内中和的浓度依赖效应 | 第56-58页 |
| 3.2 EV71 VP1特异性IgG单克隆抗体的筛选及其对病毒复制的影响 | 第58-74页 |
| 3.2.1 EV71 BrCr株VP1蛋白原核表达克隆构建 | 第58页 |
| 3.2.2 EV71 VP1蛋白的诱导表达纯化和鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2.3 EV71 VP1特异性杂交瘤细胞的筛选和鉴定 | 第59-60页 |
| 3.2.4 利用竞争性ELISA验证VP1单克隆抗体识别表位 | 第60-62页 |
| 3.2.5 检测VP1-IgGs对VP1消化的小片段多肽的识别表位 | 第62-63页 |
| 3.2.6 VP1-IgGs腹水制备与抗体纯化 | 第63-66页 |
| 3.2.7 VP1-IgGs体外中和实验 | 第66-67页 |
| 3.2.8 VP1-IgGs协同中和实验 | 第67-68页 |
| 3.2.9 EV71在THP-1细胞中的复制曲线测定 | 第68-69页 |
| 3.2.10 EV71 VP1-IgGs在THP-1细胞中的对病毒复制的影响 | 第69-71页 |
| 3.2.11 WesternBlot鉴定EV71-VP1 IgGs识别VP1抗原表位 | 第71-74页 |
| 第4章 结论与展望 | 第74-80页 |
| 4.1 结论 | 第74-76页 |
| 4.1.1 EV712A特异性IgA单克隆抗体的筛选及其对病毒复制的影响 | 第74-75页 |
| 4.1.2 EV71VP1特异性IgG单克隆抗体的筛选及其对病毒复制的影响 | 第75-76页 |
| 4.2 讨论 | 第76-79页 |
| 4.2.1 关于EV71非结构蛋白作为免疫靶标的选择 | 第76-78页 |
| 4.2.2 EV71抗体依赖性增强效应的测定 | 第78-79页 |
| 4.3 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 附录 常用缩写 | 第90-92页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第92-93页 |
