| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一部分 MiR-630在宫颈癌中生物功能研究 | 第14-56页 |
| 1、前言 | 第14-16页 |
| 2、材料与方法 | 第16-37页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第16-21页 |
| 2.1.1、材料 | 第16页 |
| 2.1.2、主要试剂 | 第16-21页 |
| 2.2、实验方法 | 第21-37页 |
| 1 细胞复苏 | 第21页 |
| 2 细胞培养 | 第21页 |
| 3 细胞冻存 | 第21-22页 |
| 4 SiRNA分别瞬时转染宫颈癌细胞细胞 | 第22-23页 |
| 5 Real-time PCR检测 | 第23-25页 |
| 6 芯片杂交的操作 | 第25-28页 |
| 7 Western Blot实验 | 第28-29页 |
| 8 细胞蛋白提取 | 第29-30页 |
| 9 细胞迁移侵袭实验 | 第30-31页 |
| 10 细胞增殖实验（CCK-8细胞活力实验） | 第31页 |
| 11 构建过表达载体及稳定转染细胞 | 第31-33页 |
| 12 microRNA芯片制备 | 第33-34页 |
| 13 microRNA芯片数据分析 | 第34-35页 |
| 14 动物实验 | 第35-36页 |
| 15 统计分析 | 第36-37页 |
| 3、结果 | 第37-53页 |
| 3.1、宫颈癌细胞中HPV16E6E7干扰效率验证 | 第37-38页 |
| 3.2、在HPV16/18型宫颈癌细胞中敲低E6/E7后引起microRNA显著上调 | 第38-40页 |
| 3.3、MiR-630在宫颈癌细胞中的表达水平检测 | 第40-42页 |
| 3.4、MiR-630在宫颈癌细胞株中稳定的干扰及过表达效率验证 | 第42-43页 |
| 3.5、MiR-630过表达或干扰对宫颈癌细胞体外的增殖无影响 | 第43-45页 |
| 3.6、MiR-630过表达后抑制宫颈癌细胞株的迁移能力 | 第45-46页 |
| 3.7、MiR-630干扰后促进宫颈癌细胞株的迁移能力 | 第46-47页 |
| 3.8、MiR-630过表达或干扰后对宫颈癌细胞株的侵袭能力的影响 | 第47-48页 |
| 3.9 、过表达miR-630后可在体内抑制肿瘤细胞的侵袭与转移 | 第48-49页 |
| 3.10、稳定干扰和过表达miR-630后,影响宫颈癌细胞EMT表型 | 第49-50页 |
| 3.11、稳定干扰和过表达miR-630后,宫颈癌细胞的EMT表型的标志物表达发生了改变 | 第50-53页 |
| 4、讨论 | 第53-56页 |
| 第二部分 MiR-630在宫颈癌细胞的分子机制研究 | 第56-84页 |
| 1、前言 | 第56-58页 |
| 2、材料与方法 | 第58-70页 |
| 2.1 材料 | 第58-59页 |
| 2.2 方法 | 第59-70页 |
| 1 细胞复苏 | 第59页 |
| 2 细胞培养 | 第59页 |
| 3 细胞冻存 | 第59页 |
| 4 SiRNA分别瞬时转染宫颈癌细胞细胞 | 第59-60页 |
| 5 Real-time PCR检测 | 第60页 |
| 6 Western Blot实验 | 第60页 |
| 7 细胞蛋白提取 | 第60页 |
| 8 荧光酶素报告基因 | 第60-61页 |
| 9 荧光素酶载体构建 | 第61-65页 |
| 10 染色质免疫共沉淀 | 第65-68页 |
| 11 网站上预测CTHRC1上游转录调控因子 | 第68页 |
| 12 分析microRNA-630影响的下游靶基因 | 第68-69页 |
| 13 统计分析 | 第69-70页 |
| 3、结果 | 第70-82页 |
| 3.1、预测miR-630下游靶基因 | 第70页 |
| 3.2、CTHRC1是miR-630下游调控的目的基因 | 第70-73页 |
| 3.3、MiR-630负向调控CTHRC1的表达 | 第73-74页 |
| 3.4、MiR-630通过负向调控CTHRC1的表达影响宫颈癌细胞的侵袭与迁移能力 | 第74-76页 |
| 3.5、MiR-630通过负向调控CTHRC1的表达影响宫颈癌细胞的EMT表型 | 第76-77页 |
| 3.6、预测调控miR-630的转录因子 | 第77-79页 |
| 3.7、P53可以在转录水平上调控miR-630的表达 | 第79-82页 |
| 4、讨论 | 第82-84页 |
| 综述 | 第84-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 攻读学位期间成果 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
