| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 黄曲霉和黄曲霉毒素 | 第9-10页 |
| 1.2 MAPK通路简介 | 第10-11页 |
| 1.3 响应信息素MAPK相关基因研究进展 | 第11-17页 |
| 1.3.1 fus3基因研究进展 | 第11-16页 |
| 1.3.2 ste11基因的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.4 本研究的意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 实验所用菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 本研究所用的引物 | 第18-21页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第21页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 蛋白序列分析 | 第22页 |
| 2.2.2 黄曲霉RNA提取和反转录 | 第22-23页 |
| 2.2.3 DNA扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.4 质粒提取和胶回收 | 第24页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.6 fus3基因产物回收、酶切以及连接 | 第25页 |
| 2.2.7 重组质粒的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.8 转化子的鉴定 | 第26页 |
| 2.2.9 Fus3蛋白诱导表达和检测 | 第26页 |
| 2.2.10 蛋白纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.11 黄曲霉毒素提取 | 第27页 |
| 2.2.12 黄曲霉毒素的检测 | 第27页 |
| 2.2.13 黄曲霉原生质体的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.14 黄曲霉基因敲除转化 | 第28页 |
| 2.2.15 黄曲霉敲除转化子的验证 | 第28-29页 |
| 2.2.16 黄曲霉DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.17 黄曲霉生长速率测定 | 第29页 |
| 2.2.18 黄曲霉产孢量统计 | 第29页 |
| 2.2.19 分生孢子梗形态观察 | 第29-30页 |
| 2.2.20 黄曲霉产菌核数统计 | 第30页 |
| 2.2.21 定点突变 | 第30页 |
| 2.2.22 黄曲霉侵染花生 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-54页 |
| 3.1 黄曲霉培养条件的探索 | 第32-33页 |
| 3.2 fus3基因在黄曲霉生长和产毒以及致病性过程的功能分析 | 第33-46页 |
| 3.2.1 基因PCR的扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.2 原核表达载体的构建 | 第35页 |
| 3.2.3 融合蛋白的表达和纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.4 Fus3氨基酸序列结构特征分析 | 第36-38页 |
| 3.2.5 fus3基因敲除突变体的获得 | 第38-40页 |
| 3.2.6 fus3调控黄曲霉营养生长 | 第40页 |
| 3.2.7 fus3基因参与分生孢子梗和分生孢子的产生 | 第40-42页 |
| 3.2.8 fus3参与黄曲霉菌核形成 | 第42-43页 |
| 3.2.9 fus3参与黄曲霉毒素的合成 | 第43-44页 |
| 3.2.10 fus3基因对黄曲霉侵染花生的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.11 互补载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.3 ste11在黄曲霉生长和产毒中的功能研究 | 第46-54页 |
| 3.3.1 Ste11氨基酸序列结构分析 | 第46-48页 |
| 3.3.2 ste11调控黄曲霉营养生长 | 第48-49页 |
| 3.3.3 ste11参与分生孢子的产生 | 第49-50页 |
| 3.3.4 ste11参与黄曲霉毒素的合成 | 第50页 |
| 3.3.5 ste11参与菌核的形成 | 第50-51页 |
| 3.3.6 ste11参与黄曲霉侵染花生 | 第51-52页 |
| 3.3.8 互补载体及点突变载体构建 | 第52-54页 |
| 4 讨论和小结 | 第54-58页 |
| 4.1 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1.1 黄曲霉在不同培养条件下产毒素的差异 | 第54页 |
| 4.1.2 黄曲霉敲除突变体在生长、产毒以及致病性的分析 | 第54-56页 |
| 4.1.3 回复突变结果分析 | 第56页 |
| 4.2 小结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
