| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| 1 烟曲霉感染的流行病学现状 | 第11-12页 |
| 2 临床烟曲霉感染的治疗现状 | 第12页 |
| 3 烟曲霉对唑类药物耐药机制 | 第12-14页 |
| 4 应对唑类抗真菌药物耐药所采取的策略和分析 | 第14-16页 |
| 5 汉防己甲素概况及其作为唑类药物增效剂的研究进展 | 第16-18页 |
| 6 本研究的内容、创新性及意义 | 第18-20页 |
| 第一部分 汉防己甲素对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉体外增效活性研究 | 第20-42页 |
| （一）以微量稀释法测定最大非细胞毒性剂量汉防己甲素对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉活性 | 第20-25页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 菌株 | 第20页 |
| 1.2 药物 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.4 实验仪器与设备 | 第21页 |
| 1.5 药物与主要试剂的配制 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-22页 |
| 2.1 菌株的保存与活化 | 第21-22页 |
| 2.2 菌悬液制备 | 第22页 |
| 2.3 TET对23株烟曲霉孢子相的最大非细胞毒性剂量测定 | 第22页 |
| 2.4 ITR或VRC单独及联合最大非细胞毒性剂量的 TET 抗烟曲霉活性测定 | 第22页 |
| 2.5 统计学分析 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-25页 |
| 3.1 质控标准 | 第22页 |
| 3.2 TET对烟曲霉的非细胞毒性剂量 | 第22-23页 |
| 3.3 ITR或VRC单独及联合TET抗烟曲霉活性 | 第23-25页 |
| （二）以棋盘式微量液基稀释法测定并评价汉防己甲素与伊曲康唑和伏立康唑的体外静态联合抗烟曲霉作用 | 第25-33页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1 菌株 | 第25页 |
| 1.2 药物 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 1.4 实验仪器与设备 | 第25-26页 |
| 1.5 药物与主要试剂的配制 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-28页 |
| 2.1 菌株的保存与活化 | 第26页 |
| 2.2 菌悬液配制 | 第26-27页 |
| 2.3 用棋盘法测定TET联合ITR或VRC抗烟曲霉活性 | 第27页 |
| 2.4 药物联合作用效果的评价 采用FICI法和ΔE法对棋盘式微量液基稀释法 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-33页 |
| 3.1 质控标准 | 第28页 |
| 3.2 棋盘法测定药物对烟曲霉的活性 | 第28页 |
| 3.3 药物联合作用效果的评价 | 第28-33页 |
| （三）以时间-杀菌曲线法测定并评价汉防己甲素与伊曲康唑和伏立康唑的体外动态联合抗烟曲霉作用 | 第33-42页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1 菌株 | 第33页 |
| 1.2 药物 | 第33页 |
| 1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 1.4 实验仪器与设备 | 第33-34页 |
| 1.5 药物与主要试剂的配制 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-35页 |
| 2.1 菌株的保存与活化 | 第34页 |
| 2.2 菌悬液制备 | 第34-35页 |
| 2.3 时间-杀菌作用体系的制备 | 第35页 |
| 2.4 时间-杀菌作用体系的测定 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第二部分 汉防己甲素对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉体内增效活性研究 | 第42-50页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 菌株 | 第42页 |
| 1.2 药物 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 1.4 实验仪器与设备 | 第42-43页 |
| 1.5 药物与主要试剂的配制 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-44页 |
| 2.1 菌株的保存与活化 | 第43页 |
| 2.2 菌悬液配制 | 第43页 |
| 2.3 小鼠 | 第43页 |
| 2.4 小鼠免疫抑制与系统造模 | 第43页 |
| 2.5 分组及给药 | 第43-44页 |
| 2.6 疗效评价 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-48页 |
| 3.1 小鼠生存率 | 第44-46页 |
| 3.2 病原学检查 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 5 小结 | 第49-50页 |
| 第三部分 汉防己甲素对伊曲康唑和伏立康唑抗烟曲霉增效活性机制研究 | 第50-66页 |
| （一）采用R6G外排法测定TET对烟曲霉外排泵功能影响 | 第50-57页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1 菌株 | 第50页 |
| 1.2 药物 | 第50页 |
| 1.3 主要试剂 | 第50页 |
| 1.4 实验仪器与设备 | 第50-51页 |
| 1.5 药物与主要试剂的配制 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| 2.1 菌株的保存与活化 | 第51页 |
| 2.2 菌悬液配制 | 第51-52页 |
| 2.3 罗丹明 6G (R6G) 标准曲线的确立 | 第52页 |
| 2.4 烟曲霉细胞对R6G的吸收和外排 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| 3.1 R6G标准曲线的建立 | 第53页 |
| 3.2 烟曲霉对R6G的吸收 | 第53-54页 |
| 3.3 烟曲霉对R6G的外排 | 第54-57页 |
| （二）采用RT-PCR法测定外排泵相关基因药物作用前后的相对表达量 | 第57-66页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1 菌株 | 第57页 |
| 1.2 药物 | 第57页 |
| 1.3 主要试剂 | 第57页 |
| 1.4 实验仪器与设备 | 第57-58页 |
| 1.5 药物与主要试剂的配制 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-62页 |
| 2.1 菌株的保存与活化 | 第58页 |
| 2.2 菌悬液配制 | 第58页 |
| 2.3 药物处理菌液 | 第58-59页 |
| 2.4 菌体RNA提取 | 第59页 |
| 2.5 样品RNA纯化 | 第59-60页 |
| 2.6 样品RNA质量鉴定 | 第60页 |
| 2.7 RNA逆转录合成cDNA | 第60页 |
| 2.8 实时荧光PCR | 第60-61页 |
| 2.9 统计学分析 | 第61-62页 |
| 3 结果 | 第62-64页 |
| 3.1 外排泵基因的m RNA水平的相对表达量 | 第62页 |
| 3.2 药物作用后外排泵基因m RNA水平相对表达量 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 缩略词表 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
