| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract(英文摘要) | 第7-10页 |
| 英文缩略语索引 | 第17-20页 |
| 第一部分 绪论 | 第20-36页 |
| 1.1 白血病概述 | 第20-21页 |
| 1.2 过继免疫细胞治疗 | 第21-31页 |
| 1.2.1 CIK概述 | 第21-22页 |
| 1.2.2 CIK的生物学研究 | 第22-31页 |
| 1.2.3 小结 | 第31页 |
| 1.3 微囊泡与肿瘤微环境 | 第31-36页 |
| 1.3.1 微囊泡概述 | 第31-33页 |
| 1.3.2 微囊泡与白血病的免疫调节 | 第33-34页 |
| 1.3.3 微囊泡作为新兴生物标志物 | 第34-35页 |
| 1.3.4 研究目的及意义 | 第35-36页 |
| 第二部分 CIK细胞的培养与鉴定 | 第36-43页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 实验材料 | 第36-38页 |
| 2.2.1 实验对象 | 第36页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.3 主要实验设备 | 第37页 |
| 2.2.4 主要耗材与溶剂配制 | 第37-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.3.1 CIK细胞的诱导和扩增 | 第38-39页 |
| 2.3.2 流式细胞术检测CIK细胞相关表型 | 第39页 |
| 2.3.3 CCK8法检测CIK细胞对K562细胞的杀伤作用 | 第39页 |
| 2.3.4 统计学分析 | 第39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-41页 |
| 2.4.1 倒置显微镜观察CIK细胞形态 | 第39-40页 |
| 2.4.2 CIK细胞表型分析 | 第40-41页 |
| 2.4.3 CIK细胞对K562细胞的杀伤作用 | 第41页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第41-43页 |
| 第三部分 CIK细胞源微囊泡的提取与鉴定 | 第43-59页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-46页 |
| 3.2.1 实验对象 | 第43页 |
| 3.2.2 主要实验试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.3 主要实验设备 | 第44-45页 |
| 3.2.4 主要耗材与溶剂配制 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-52页 |
| 3.3.1 梯度离心法提取CIK细胞源微囊泡 | 第46页 |
| 3.3.2 ExoQuick试剂盒提取CIK细胞源微囊泡 | 第46-47页 |
| 3.3.3 扫描电镜观察CIK细胞源微囊泡形态 | 第47页 |
| 3.3.4 qRT-PCR检测微囊泡mRNA相对表达水平 | 第47-50页 |
| 3.3.5 WesternBlot检测CIK细胞源微囊泡标志蛋白表达 | 第50-52页 |
| 3.3.6 统计学分析 | 第52页 |
| 3.4 实验结果 | 第52-56页 |
| 3.4.1 扫描电镜观察CIK细胞源微囊泡形态 | 第52-53页 |
| 3.4.2 HSP-70,穿孔素,颗粒酶,CD2与TCR-αmRNA在CIK细胞源微囊泡中的表达 | 第53-54页 |
| 3.4.3 GZM-B,HSP-70,β-actin,CD2,CD9与TCR-α蛋白在CIK细胞源微囊泡中的表达 | 第54-56页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第56-59页 |
| 第四部分 CIK细胞源微囊泡对髓系白血病细胞增殖、凋亡及迁移影响 | 第59-71页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.2.1 细胞株 | 第59页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第59-60页 |
| 4.2.3 主要实验设备 | 第60-61页 |
| 4.2.4 主要耗材与溶剂配制 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 4.3.1 K562细胞复苏、培养及冻存 | 第61页 |
| 4.3.2 细胞计数 | 第61-62页 |
| 4.3.3 CCK8法检测CIK细胞培养上清对K562细胞生长的影响 | 第62页 |
| 4.3.4 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第62页 |
| 4.3.5 Transwell实验检测细胞迁移能力 | 第62-63页 |
| 4.3.6 qRT-PCR与WesternBlot检测MMP-9、VEGF和IDO在K细胞中表达 | 第63-64页 |
| 4.3.7 统计学分析 | 第64页 |
| 4.4 实验结果 | 第64-69页 |
| 4.4.1 CIK细胞培养上清对K562细胞生长的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.2 CIK细胞源微囊泡对髓系白血病K562细胞的凋亡影响 | 第65页 |
| 4.4.3 CIK细胞源微囊泡对髓系白血病K562细胞的迁移影响 | 第65-66页 |
| 4.4.4 MMP-9,VEGF,IDO-1与IDO-2基因在K562细胞中的表达 | 第66-67页 |
| 4.4.5 MMP-9,VEGF,IDO-1与IDO-2蛋白在K562细胞中的表达 | 第67-69页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第69-71页 |
| 第五部分 急性髓系白血病患者血清外泌体源miRNA的表达谱及生物信息学分析 | 第71-110页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 实验材料 | 第71-73页 |
| 5.2.1 实验对象 | 第71-72页 |
| 5.2.2 主要实验试剂 | 第72页 |
| 5.2.3 主要试验设备 | 第72-73页 |
| 5.3 实验方法 | 第73-75页 |
| 5.3.1 血清样本收集与处理 | 第73页 |
| 5.3.2 血清外泌体与miRNA提取 | 第73页 |
| 5.3.3 血清外泌体源miRNA表达谱构建与分析 | 第73-75页 |
| 5.4 实验结果 | 第75-108页 |
| 5.4.1 测序文库的质量评估 | 第75-76页 |
| 5.4.2 HiSeqX10测序获得的目的smallRNA | 第76-78页 |
| 5.4.3 smallRNA分类注释 | 第78-79页 |
| 5.4.4 组间差异表达的已知miRNA | 第79-85页 |
| 5.4.5 组间差异表达的新miRNA | 第85页 |
| 5.4.6 靶基因预测 | 第85-92页 |
| 5.4.7 靶基因GO分析与KEGG分析 | 第92-108页 |
| 5.5 讨论与小结 | 第108-110页 |
| 第六部分 结论 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-129页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文与目录 | 第129-130页 |
| 附录B 外泌体在白血病免疫调节中的作用 | 第130-141页 |
| 附录C 引物融解曲线 | 第141-144页 |
