| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要缩写词表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 鸡沙门氏菌病检测方法的研究进展 | 第13-22页 |
| 1 沙门氏菌概括 | 第13-17页 |
| 1.1 沙门氏菌病原特征 | 第13-14页 |
| 1.2 流行病学 | 第14页 |
| 1.3 生化特性 | 第14-15页 |
| 1.4 临床症状 | 第15页 |
| 1.5 病理变化 | 第15页 |
| 1.6 致病机理 | 第15-17页 |
| 1.6.1 脂多糖 | 第15-16页 |
| 1.6.2 肠毒素 | 第16页 |
| 1.6.3 侵袭蛋白 | 第16-17页 |
| 1.6.4 毒力岛和Ⅲ型分泌系统 | 第17页 |
| 2 鸡沙门氏菌病实验室诊断技术 | 第17-22页 |
| 2.1 传统的病原学检测 | 第17-18页 |
| 2.2 分子生物学方法 | 第18-19页 |
| 2.2.1 PCR | 第18-19页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR | 第19页 |
| 2.2.3 核酸探针技术 | 第19页 |
| 2.3 免疫学诊断方法 | 第19-22页 |
| 2.3.1 免疫荧光技术 | 第19-20页 |
| 2.3.2 ELISA方法 | 第20页 |
| 2.3.3 免疫胶体金技术 | 第20-22页 |
| 第二章 试验部分 | 第22-71页 |
| 试验一 鸡沙门氏菌病原的分离鉴定及耐药性分析 | 第22-30页 |
| 1 材料与方法 | 第22-24页 |
| 1.1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1.1 病料来源与菌株 | 第22页 |
| 1.1.2 主要仪器与试剂 | 第22-23页 |
| 1.2 方法 | 第23-24页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第23页 |
| 1.2.2 平板凝集试验 | 第23页 |
| 1.2.3 细菌的分离与培养 | 第23页 |
| 1.2.4 沙门氏菌生化鉴定 | 第23页 |
| 1.2.5 眼观病变 | 第23页 |
| 1.2.6 血清学试验 | 第23-24页 |
| 1.2.7 常规PCR检测 | 第24页 |
| 1.2.8 药敏试验 | 第24页 |
| 2 结果 | 第24-28页 |
| 2.1 平板凝集试验结果 | 第24页 |
| 2.2 分离株的培养特性 | 第24-25页 |
| 2.3 生化鉴定和血清型试验 | 第25-26页 |
| 2.4 大体剖检变化 | 第26-27页 |
| 2.5 分离菌PCR鉴定结果及序列分析 | 第27页 |
| 2.6 药敏试验结果 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-30页 |
| 试验二 鸡沙门氏菌套式PCR方法的建立及初步临床应用 | 第30-41页 |
| 1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.1.1 菌株及临床病料 | 第31页 |
| 1.1.2 试剂及仪器 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-33页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第31页 |
| 1.2.2 重组质粒制备 | 第31-32页 |
| 1.2.3 最佳引物体积用量的确立 | 第32页 |
| 1.2.4 PCR 反应体系 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-39页 |
| 2.1 目的基因PCR扩增及测序结果 | 第33-34页 |
| 2.2 重组质粒标准品的鉴定 | 第34页 |
| 2.3 套式PCR方法的建立 | 第34-39页 |
| 2.3.1 最佳引物体积的确立 | 第34-35页 |
| 2.3.2 退火温度的优化 | 第35-36页 |
| 2.3.3 灵敏性、重复性和稳定性试验 | 第36-37页 |
| 2.3.4 套式PCR方法的特异性分析 | 第37-38页 |
| 2.3.5 临床样品的检测结果 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 试验三 环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测鸡沙门菌方法的建立 | 第41-54页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 1.1 材料 | 第42页 |
| 1.1.1 试验菌种及来源 | 第42页 |
| 1.1.2 主要仪器、试剂及动物 | 第42页 |
| 1.2 方法 | 第42-46页 |
| 1.2.1 引物及探针的设计与合成 | 第42-44页 |
| 1.2.2 细菌培养和DNA模板制备 | 第44页 |
| 1.2.3 LAMP-LFD检测方法的建立及反应条件优化 | 第44-45页 |
| 1.2.4 LFD检测LAMP反应产物 | 第45页 |
| 1.2.5 LAMP-LFD的特异性和重复性实验 | 第45页 |
| 1.2.6 LAMP-LFD的灵敏度实验 | 第45页 |
| 1.2.7 沙门菌病原人工污染的鸡蛋及临床样品检测 | 第45-46页 |
| 2 | 第46-52页 |
| 2.1 沙门氏菌LAMP-LFD检测方法的建立 | 第46-47页 |
| 2.2 LAMP扩增最佳反应条件的确定 | 第47-49页 |
| 2.3 LAMP-LFD检测方法的特异性和重复性试验 | 第49-50页 |
| 2.4 LAMP-LFD灵敏度分析 | 第50-51页 |
| 2.5 LAMP-LFD检测鸡沙门氏菌人工污染的鸡蛋及临床样品 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 试验四 鸡沙门氏菌免疫胶体金试纸条的建立及初步应用 | 第54-71页 |
| 1 材料与方法 | 第55-60页 |
| 1.1 材料 | 第55页 |
| 1.1.1 菌种、质粒及血清 | 第55页 |
| 1.1.2 试剂及仪器 | 第55页 |
| 1.2 方法 | 第55-60页 |
| 1.2.1 鸡沙门氏菌invA基因的原核表达 | 第55-57页 |
| 1.2.2 融合蛋白的Western blotting分析 | 第57页 |
| 1.2.3 间接ELISA方法鉴定重组蛋白的活性 | 第57页 |
| 1.2.4 玻璃容器的清洁 | 第57页 |
| 1.2.5 胶体金溶液的制备 | 第57-58页 |
| 1.2.6 胶体金标记最佳pH值的确定 | 第58页 |
| 1.2.7 胶体金标记抗体最适浓度的选择 | 第58页 |
| 1.2.8 金标复合物的制备及纯化 | 第58页 |
| 1.2.9 免疫层析NC膜的制备 | 第58页 |
| 1.2.10 胶体金试纸条的组装及结果判定 | 第58-59页 |
| 1.2.11 胶体金试纸条检测方法性能的验证 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-68页 |
| 2.1 鸡沙门氏菌invA基因的PCR扩增、克隆及鉴定 | 第60-61页 |
| 2.2 InvA基因原核表达载体pET-30a-invA的PCR和酶切鉴定 | 第61-62页 |
| 2.3 InvA重组蛋白的表达和纯化 | 第62-63页 |
| 2.4 InvA重组蛋白的Western blotting分析 | 第63-64页 |
| 2.5 ELISA检测InvA重组蛋白的活性结果 | 第64页 |
| 2.6 胶体金溶液制备及鉴定 | 第64页 |
| 2.7 最佳标记pH值及抗体浓度的确定 | 第64-65页 |
| 2.8 免疫胶体金试纸条的组装及检测结果判定 | 第65-66页 |
| 2.9 免疫胶体金试纸条检测方法性能的验证结果 | 第66-68页 |
| 2.9.1 试纸条特异性检测结果 | 第66-67页 |
| 2.9.2 试纸条灵敏性检测结果 | 第67-68页 |
| 2.9.3 试纸条的稳定性和重复性检测结果 | 第68页 |
| 2.9.4 试纸条的初步临床样品检测结果 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 全文结论 | 第71-72页 |
| 论文的创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83页 |
