| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 渗透胁迫 | 第13-14页 |
| 1.2 植物应对渗透胁迫的策略 | 第14-16页 |
| 1.2.1 渗透调节物质的积累 | 第14页 |
| 1.2.2 渗透胁迫应答基因的表达 | 第14-16页 |
| 1.3 WRKY转录因子的发现 | 第16页 |
| 1.4 WRKY转录因子的结构特点 | 第16-17页 |
| 1.5 WRKY转录因子的分类与进化 | 第17-19页 |
| 1.6 WRKY转录因子结合的DNA序列 | 第19-20页 |
| 1.7 WRKY转录因子参与的生物学过程 | 第20-24页 |
| 1.7.1 生物胁迫 | 第20-21页 |
| 1.7.2 非生物胁迫 | 第21-22页 |
| 1.7.3 生长发育 | 第22-23页 |
| 1.7.4 其他作用 | 第23-24页 |
| 1.8 本实验的目的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-42页 |
| 2.2.1 植物材料的培养与处理 | 第27页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 利用Trizol试剂提取烟草总RNA | 第27页 |
| 2.2.2.2 利用CTAB法提取棉花总RNA | 第27-28页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.4 cDNA的纯化及末端加尾反应(用于5'RACE) | 第29页 |
| 2.2.4.1 cDNA的纯化 | 第29页 |
| 2.2.4.2 cDNA 5'末端加尾反应 | 第29页 |
| 2.2.5 cDNA全长序列的获得 | 第29-32页 |
| 2.2.5.1 利用简并引物进行PCR扩增以获取中间片段 | 第29-30页 |
| 2.2.5.2 5'RACE获得5'序列 | 第30-31页 |
| 2.2.5.3 3'RACE获得3'序列 | 第31-32页 |
| 2.2.5.4 cDNA全长序列的获得 | 第32页 |
| 2.2.6 目的片段的回收 | 第32页 |
| 2.2.7 目的片段与克隆载体的连接 | 第32-33页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第33页 |
| 2.2.8.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.8.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 2.2.9 试剂盒法微量提取大肠杆菌质粒 | 第33-34页 |
| 2.2.10 重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.2.11 植物基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.11.1 CTAB法大量提取基因组DNA | 第34-35页 |
| 2.2.11.2 植物基因组DNA的纯化 | 第35页 |
| 2.2.11.3 小量法提取基因组DNA | 第35页 |
| 2.2.12 全长基因组序列的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.13 基因亚细胞定位(基因枪法) | 第36-38页 |
| 2.2.13.1 瞬时表达载体的制备 | 第36页 |
| 2.2.13.2 基因枪微弹的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.13.3 基因枪转化 | 第37-38页 |
| 2.2.14 植物表达载体的构建及其转化 | 第38-40页 |
| 2.2.14.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.14.2 植物表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.2.14.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第38页 |
| 2.2.14.4 农杆菌介导的烟草转化 | 第38-39页 |
| 2.2.14.5 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第39-40页 |
| 2.2.15 转基因植物GUS组织化学染色分析 | 第40页 |
| 2.2.16 3,3'-二氨基联苯胺(3,3'-diaminobenzidine,DAB)染色 | 第40页 |
| 2.2.17 气孔开度测试 | 第40页 |
| 2.2.18 植物抗氧化酶活性测定 | 第40-41页 |
| 2.2.19 数据库及网络资源 | 第41页 |
| 2.2.20 酵母试验 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-61页 |
| 3.1 棉花GhWRKY41基因的分离 | 第42-43页 |
| 3.1.1 GhWRKY41中间片段的分离 | 第42页 |
| 3.1.2 GhWRKY41 5'片段的分离 | 第42页 |
| 3.1.3 GhWRKY41 3'片段的分离 | 第42-43页 |
| 3.1.4 GhWRKY41全长cDNA序列的分离 | 第43页 |
| 3.2 棉花GhWRKY41基因的序列分析 | 第43-46页 |
| 3.2.1 GhWRKY41全长cDNA序列分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 GhWRKY41编码的蛋白质序列分析及其进化分析 | 第45-46页 |
| 3.3 棉花GhWRKY41基因组的分离及序列分析 | 第46-47页 |
| 3.3.1 GhWRKY41 DNA序列的分离 | 第46页 |
| 3.3.2 GhWRKY41启动子序列的分离 | 第46-47页 |
| 3.4 棉花GhWRKY41的亚细胞定位分析 | 第47-48页 |
| 3.5 棉花GhWRKY41的转录活性分析 | 第48-49页 |
| 3.6 棉花GhWRKY41的表达模式 | 第49页 |
| 3.7 棉花GhWRKY41基因的表达特性分析 | 第49-51页 |
| 3.8 GhWRKY41过表达本生烟植株的获得及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.8.1 植物表达载体的构建及过表达植株的获得 | 第51页 |
| 3.8.2 过表达植株的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.9 GhWRKY41参与植物应对干旱与高盐胁迫的反应 | 第52-61页 |
| 3.9.1 GhWRKY41过表达增强植株对干旱胁迫的抗性 | 第52-55页 |
| 3.9.2 过表达GhWRKY41增强转基因植株的抗氧化能力 | 第55-56页 |
| 3.9.3 GhWRKY41过表达增强植株对高盐胁迫的抗性及其抗氧化能力 | 第56-59页 |
| 3.9.4 过表达GhWRKY41减小渗透胁迫下叶片的气孔开度 | 第59-60页 |
| 3.9.5 过表达GhWRKY41对气孔运动的调控作用依赖于ABA | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第75页 |
