| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略语 | 第9-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-25页 |
| 1. 类风湿性关节炎（RA）研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1 类风湿性关节炎（RA）简介 | 第13页 |
| 1.2 RA 治疗方法的选择 | 第13-14页 |
| 1.3 基因治疗的载体系统 | 第14-16页 |
| 2. SPRY2 基因的研究进展 | 第16-20页 |
| 2.1 SPRY 家族简介 | 第16页 |
| 2.2 SPRY2 的结构和功能 | 第16-17页 |
| 2.3 SPRY2 的研究进展 | 第17-20页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 第二部分 实验部分 | 第25-78页 |
| 第一章 SPRY2 基因的克隆和活性鉴定 | 第25-47页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1 引物、菌株和质粒、细胞系 | 第25页 |
| 1.2 酶和试剂 | 第25-26页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-39页 |
| 2.1 pDC315/hSPRY2 重组质粒的构建 | 第26-30页 |
| 2.2 重组质粒的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3 细胞转染与转染效率检测 | 第31-33页 |
| 2.4 反转录 PCR（RT-PCR）检测 hSPRY2 基因在 HEK293T 细胞中表达情况 | 第33-36页 |
| 2.5 Western Blot 检测蛋白表达 | 第36-39页 |
| 2.6 SPRY2 基因在 HEK293T 细胞中的细胞增殖与存活检测 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| 3.1 成功构建重组表达质粒 pDC315/hSPRY2 | 第39-40页 |
| 3.2 SPRY2 基因在 HEK293T 细胞中无表达 | 第40-41页 |
| 3.3 重组质粒 pDC315/hSPRY2 的表达鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4 SPRY2 分子促进 HEK293T 细胞的增殖 | 第42-43页 |
| 3.5 SPRY2 分子促进 HEK293T 细胞存活 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-47页 |
| 第二章 重组腺病毒 AdSPRY2 的包装、鉴定和活性检测 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1 引物、菌株、质粒 | 第47页 |
| 1.2 酶和试剂 | 第47-48页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| 2.1 重组腺病毒载体的包装、纯化及滴度测定 | 第48页 |
| 2.2 重组腺病毒载体的活性鉴定 | 第48-50页 |
| 3 结果 | 第50-54页 |
| 3.1 重组腺病毒的包装及表达 | 第50-51页 |
| 3.2 L929 细胞中存在 SPRY2 分子的天然表达 | 第51-52页 |
| 3.3 SPRY2 在 L929 细胞中的表达水平随 TNF-α 刺激浓度升高而升高 | 第52-53页 |
| 3.4 SPRY2 促进 TNF-α 诱导的 L929 细胞死亡 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第三章 SPRY2 体外抑制 RAFLS 的增殖和炎性反应 | 第57-68页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1 引物、菌株、细胞 | 第57页 |
| 1.2 酶和试剂 | 第57页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-61页 |
| 2.1 RT-PCR 检测人 FLS 细胞中 hSPRY2 基因的天然表达 | 第58页 |
| 2.2 Western Blot 检测 | 第58-59页 |
| 2.3 TNF‐α 刺激 FLS 细胞后 SPRY2 基因表达水平变化 | 第59-61页 |
| 3 结果 | 第61-65页 |
| 3.1 人 FLS 细胞中存在 SPRY2 分子的天然表达 | 第61-63页 |
| 3.2 SPRY2 在 FLS 细胞中的基因表达水平随 TNF-α 刺激浓度升高而降低 | 第63页 |
| 3.3 SPRY2 在 FLS 细胞中的表达水平随 TNF-α刺激时间升高而降低 | 第63-64页 |
| 3.4 过表达 SPRY2 抑制 FLS 细胞异常增殖 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第四章 重组腺病毒 Ad5SPRY2 抑制大鼠佐剂诱导关节炎 | 第68-78页 |
| 1 材料 | 第68页 |
| 1.1 菌株、病毒 | 第68页 |
| 1.2 酶和试剂 | 第68页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第68页 |
| 2 方法 | 第68-71页 |
| 2.1 大鼠佐剂诱导关节炎（AIA）动物模型的制备 | 第68-69页 |
| 2.2 实验分组及方案 | 第69页 |
| 2.3 大鼠 AIA 临床指标观察和测量 | 第69-70页 |
| 2.4 组织学观察 | 第70页 |
| 2.5 促炎细胞因子分泌水平检测 | 第70-71页 |
| 3 结果 | 第71-75页 |
| 3.1 大鼠 AIA 动物模型的制备 | 第71-72页 |
| 3.2 SPRY2 有效抑制大鼠 AIA 临床进展 | 第72-73页 |
| 3.3 AdSPRY2 显著抑制大鼠关节炎的组织学反应 | 第73-74页 |
| 3.4 AdSPRY2 提高促炎细胞因子的分泌水平 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第78-80页 |
| 第四部分 附录 | 第80-83页 |
| 附录一 硕士期间参加的研究课题和发表论文 | 第80-81页 |
| 附录二 常用试剂配制方法 | 第81-82页 |
| 附录三 个人简历 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
