| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 苹果蠹蛾研究概况 | 第12-15页 |
| 1.1.1 生理生化方面 | 第12-13页 |
| 1.1.2 分子生物学领域 | 第13-14页 |
| 1.1.3 监测与防控 | 第14-15页 |
| 1.2 苹果蠹蛾嗅觉研究概况 | 第15-20页 |
| 1.2.1 气味受体 | 第17-18页 |
| 1.2.2 气味结合蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.3 气味降解酶 | 第19-20页 |
| 1.3 昆虫性信息素结合蛋白研究概况 | 第20-21页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 1.5 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.5.1 CpomPBP2 基因的克隆和序列分析 | 第22页 |
| 1.5.2 CpomPBP2 基因原核表达及纯化 | 第22页 |
| 1.5.3 CpomPBP2 基因多克隆抗体制备 | 第22页 |
| 1.5.4 CpomPBP2 基因转录和组织定位 | 第22-23页 |
| 1.6 技术路线图 | 第23-24页 |
| 第二章 试验材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 供试样本 | 第24页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.3 菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.4 生化试剂及工具酶 | 第24-25页 |
| 2.2 培养基及主要试剂配置 | 第25-27页 |
| 2.2.1 抗生素类 | 第25页 |
| 2.2.2 培养基类 | 第25页 |
| 2.2.3 1%琼脂糖凝胶 | 第25页 |
| 2.2.4 IPTG(24mg/mL) | 第25-26页 |
| 2.2.5 X-gal(20mg/mL) | 第26页 |
| 2.2.6 RNA 酶(10mg/mL) | 第26页 |
| 2.2.7 小量碱法质粒提取试剂 | 第26页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE 试剂 | 第26页 |
| 2.2.9 Western blot 试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.10 ELISA 试剂 | 第27页 |
| 2.2.11 其他 | 第27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-37页 |
| 2.3.1 总 RNA 提取 | 第27-28页 |
| 2.3.2 反转录合成 cDNA 第一链 | 第28页 |
| 2.3.3 引物设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.3.4 PCR 反应 | 第29页 |
| 2.3.5 目的基因 PCR 产物回收 | 第29-30页 |
| 2.3.6 双酶切反应 | 第30页 |
| 2.3.7 连接反应 | 第30-31页 |
| 2.3.8 氯化钙制备新鲜的感受态细胞 | 第31页 |
| 2.3.9 连接载体的转化 | 第31页 |
| 2.3.10 质粒提取(碱裂解法) | 第31-32页 |
| 2.3.11 表达载体质粒构建 | 第32页 |
| 2.3.12 重组质粒 pET28a(+)-CpomPBP2 在大肠杆菌中的表达 | 第32-33页 |
| 2.3.13 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.14 Western-blot | 第34页 |
| 2.3.15 诱导表达条件优化 | 第34-35页 |
| 2.3.16 原核表达蛋白的纯化 | 第35页 |
| 2.3.17 微孔板法测定蛋白浓度 | 第35页 |
| 2.3.18 多克隆抗体制备 | 第35-36页 |
| 2.3.19 多克隆抗体效价测定 | 第36页 |
| 2.3.20 半定量 RT-PCR | 第36页 |
| 2.3.21 蛋白粗提取 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-45页 |
| 3.1 CpomPBP2 基因的克隆和序列分析 | 第37-38页 |
| 3.1.1 苹果蠹蛾触角总 RNA 的提取质量检测 | 第37-38页 |
| 3.1.2 CpomPBP2 基因克隆 | 第38页 |
| 3.1.3 重组质粒 pMD19-CpomPBP2 酶切鉴定和测序分析 | 第38页 |
| 3.2 CpomPBP2 基因的表达质粒构建、原核表达及纯化 | 第38-43页 |
| 3.2.1 表达载体质粒构建 | 第38-39页 |
| 3.2.2 重组质粒 pET28a(+)-CpomPBP2 在大肠杆菌中的表达 | 第39-40页 |
| 3.2.3 重组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第40页 |
| 3.2.4 诱导表达条件优化 | 第40-41页 |
| 3.2.5 重组蛋白 pET28a(+)-CpomPBP2 可溶性鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.6 原核表达蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 3.3 CpomPBP2 基因多克隆抗体制备及测定 | 第43页 |
| 3.3.1 纯化蛋白浓度测定 | 第43页 |
| 3.3.2 多克隆抗体效价测定 | 第43页 |
| 3.4 CpomPBP2 基因转录和组织定位 | 第43-45页 |
| 3.4.1 RT-PCR 分析 | 第43-44页 |
| 3.4.2 Western blot 分析 | 第44-45页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第45-50页 |
| 4.1 结论 | 第45-46页 |
| 4.1.1 CpomPBP2 基因的原核表达及鉴定 | 第45页 |
| 4.1.2 重组蛋白 pET28a-CpomPBP2 诱导条件的优化 | 第45页 |
| 4.1.3 多克隆抗体制备 | 第45-46页 |
| 4.1.4 组织定位分析 | 第46页 |
| 4.2 讨论 | 第46-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
| 发表论文情况 | 第57页 |
