| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-37页 |
| 1 氯代有机污染物的微生物降解研究进展 | 第13-21页 |
| 1.1 氯代有机污染物的生物毒性及其残留 | 第13-14页 |
| 1.2 微生物对氯代有机污染物的降解 | 第14-21页 |
| 1.2.1 HCH和DDT微生物降解研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.2 其它氯代有机污染物微生物降解研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.3 氯代芳香族杀菌剂百菌清特性、残留和微生物降解 | 第18-20页 |
| 1.2.4 百菌清代谢途径 | 第20-21页 |
| 2 氯代芳香族环境污染物脱氯酶研究进展 | 第21-28页 |
| 2.1 氯代芳香族环境污染物脱氯酶分类 | 第21-22页 |
| 2.2 还原脱氯(严格厌氧条件) | 第22-23页 |
| 2.3 巯基取代的还原脱氯(有氧条件) | 第23-24页 |
| 2.4 氧化脱氯 | 第24-26页 |
| 2.5 水解脱氯 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-37页 |
| 实验部分 | 第37-79页 |
| 第一章 百菌清降解菌株的分离鉴定 | 第37-52页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第37-38页 |
| 1.2 降解菌株的富集与分离 | 第38页 |
| 1.3 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第38页 |
| 1.4 降解菌株的16S rRNA基因序列的测定 | 第38-40页 |
| 1.4.1 菌体基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| 1.4.2 降解菌株16S rRNA基因的PCR扩增 | 第39页 |
| 1.4.3 PCR产物的T/A克隆 | 第39页 |
| 1.4.4 E. coli DH5α感受态细胞的制备与酶连产物的转化 | 第39页 |
| 1.4.5 质粒DNA的小量提取 | 第39-40页 |
| 1.4.6 16S rRNA基因序列测定 | 第40页 |
| 1.5 降解菌株系统发育地位的确定 | 第40页 |
| 1.6 菌体生长量的测定 | 第40页 |
| 1.7 百菌清含量测定方法 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-49页 |
| 2.1 百菌清降解菌株的富集与分离 | 第41-42页 |
| 2.2 降解菌株的菌落形态及生理生化特征 | 第42-43页 |
| 2.3 降解菌株基因组DNA提取和16S rRNA PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2.4 三株降解菌系统分类地位鉴定 | 第44-46页 |
| 2.5 环境条件对降解菌株CTN-11生长的影响 | 第46-49页 |
| 2.5.1 温度对菌株CTN-11生长的影响 | 第46-47页 |
| 2.5.2 初始pH对菌株CTN-11生长的影响 | 第47-48页 |
| 2.5.3 NaCl浓度对菌株CTN-11生长的影响 | 第48页 |
| 2.5.4 菌株CTN-1对不同碳源利用情况 | 第48-49页 |
| 2.5.5 菌株CTN-1对不同氮源利用情况 | 第49页 |
| 2.6 菌株CTN-11对抗生素的耐受性 | 第49页 |
| 3 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第二章 降解菌株对百菌清的降解特性研究 | 第52-64页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第52页 |
| 1.2 百菌清的液相色谱检测方法 | 第52页 |
| 1.3 百菌清代谢产物羟基化百菌清(CTN-OH)的紫外和液相检测 | 第52页 |
| 1.4 百菌清代谢产物CTN-OH的串联二级质谱检测 | 第52-53页 |
| 1.5 比较3株降解菌降解速率和菌株CTN-11降解特性研究 | 第53页 |
| 1.6 降解菌CTN-11在土壤中对百菌清的降解性能 | 第53-54页 |
| 1.7 降解菌株CTN-11的脱氯机制 | 第54页 |
| 2 结果与讨论 | 第54-63页 |
| 2.1 菌株生长和百菌清降解的关系 | 第54-55页 |
| 2.2 温度对菌株CTN-11降解百菌清的影响 | 第55页 |
| 2.3 初始pH值对菌株CTN-11降解百菌清的影响 | 第55-56页 |
| 2.4 外加碳源对菌株CTN-11降解百菌清的影响 | 第56-57页 |
| 2.5 外加氮源对菌株CTN-11降解百菌清的影响 | 第57-58页 |
| 2.6 添加金属离子对菌株CTN-11降解百菌清的影响 | 第58页 |
| 2.7 三株降解菌株中的代谢产物质谱鉴定 | 第58-61页 |
| 2.8 降解菌株CTN-11在土壤中对百菌清的降解性能 | 第61-62页 |
| 2.9 降解菌CTN-11粗酶液在厌氧条件下百菌清的脱氯 | 第62-63页 |
| 3 结论 | 第63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 第三章 百菌清水解脱氯酶基因克隆、序列比对和水平转移的分子基础研究 | 第64-79页 |
| 1. 材料与方法 | 第64-67页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第64-65页 |
| 1.2 菌株及培养条件 | 第65页 |
| 1.3 质粒DNA的提取 | 第65页 |
| 1.4 菌体总DNA的提取 | 第65页 |
| 1.5 高效感受态细胞的制备 | 第65-66页 |
| 1.6 Chd和GST基因的PCR扩增 | 第66页 |
| 1.7 E.coli BL21携带降解菌CTN-11中的GST基因的功能验证 | 第66页 |
| 1.8 降解菌CTN-11总DNA的Sau3AI酶切与片段回收 | 第66-67页 |
| 1.9 酶连产物的转化与阳性克隆的筛选 | 第67页 |
| 1.10 序列测定和基因序列比较与分析 | 第67页 |
| 1.11 Chd基因水平转移的证据 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-75页 |
| 2.1 降解菌CTN-2和CTN-4中Chd基因序列测定分析 | 第67-68页 |
| 2.2 降解菌CTN-11中GST基因在E.coli BL21中功能表达 | 第68-69页 |
| 2.3 菌株CTN-11总DNA基因文库的构建与阳性克隆筛选 | 第69-72页 |
| 2.3.1 菌株CTN-11总DNA基因文库的构建 | 第69-70页 |
| 2.3.2 阳性克隆的筛选和降解能力的验证 | 第70-72页 |
| 2.4 序列测定与分析 | 第72-73页 |
| 2.5 Chd基因水平转移的证据 | 第73-75页 |
| 2.5.1 间接的逻辑证据 | 第73页 |
| 2.5.2 Chd基因水平转移的分子基础证据 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 全文总结 | 第79-81页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第81-83页 |
| 附录二 相关DNA序列 | 第83-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表或已接收的论文 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
