| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 长链非编码RNA的概念及其研究背景 | 第11-12页 |
| 2 lncRNA的功能研究 | 第12-15页 |
| 2.1 lncRNA生物学功能简介 | 第12-13页 |
| 2.2 肌细胞分化过程中lncRNA的研究 | 第13-15页 |
| 3 长链非编码RNA的作用机制 | 第15-19页 |
| 3.1 lncRNA介导的转录后调控 | 第15-16页 |
| 3.2 lncRNA介导的染色质重塑 | 第16-18页 |
| 3.3 lncRNA的其他作用形式 | 第18-19页 |
| 4 长非编码RNA的研究方法 | 第19-21页 |
| 第二章 目的和意义 | 第21-22页 |
| 第三章 材料和方法 | 第22-35页 |
| 1 实验材料 | 第22-25页 |
| 1.1 实验样品 | 第22页 |
| 1.1.1 组织样品 | 第22页 |
| 1.1.2 细胞样品 | 第22页 |
| 1.1.3 克隆载体 | 第22页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.3 主要试剂和试剂盒 | 第23页 |
| 1.4 常用试剂及其配制 | 第23-25页 |
| 1.5 lncRNA和mRNA芯片 | 第25页 |
| 1.6 主要数据库和软件 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-35页 |
| 2.1 构建小鼠组织表达谱 | 第25-27页 |
| 2.1.1 小鼠组织样总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.1.2 RNA质量浓度检测 | 第26页 |
| 2.1.3 RNA反转录成cDNA | 第26-27页 |
| 2.2 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.1 细胞复苏与冻存 | 第27-28页 |
| 2.2.2 细胞增殖和分化 | 第28页 |
| 2.3 构建干涉载体与设计siRNA片段 | 第28-29页 |
| 2.3.1 AK003290的siRNA表达载体构建 | 第28-29页 |
| 2.3.2 设计干涉片段 | 第29页 |
| 2.4 细胞转染 | 第29-30页 |
| 2.4.1 脂质体介导的shRNA转染 | 第29页 |
| 2.4.2 脂质体介导的siRNA转染 | 第29-30页 |
| 2.5 细胞RNA提取及cDNA合成 | 第30页 |
| 2.6 细胞转染后检测 | 第30-33页 |
| 2.6.1 PCR的引物设计 | 第30页 |
| 2.6.2 荧光实时定量PCR | 第30-32页 |
| 2.6.3 定量数据分析 | 第32-33页 |
| 2.7 蛋白检测分析 | 第33-35页 |
| 2.7.1 蛋白的提取 | 第33页 |
| 2.7.2 蛋白质的检测 | 第33-35页 |
| 第四章 试验结果 | 第35-55页 |
| 1 筛选与肌细胞分化相关的lncRNA | 第35-39页 |
| 1.1 设定标志基因 | 第35-36页 |
| 1.2 筛选与mRNA相关的lncRNA | 第36页 |
| 1.3 lncRNA与相关基因的相关性分析和表达谱分析 | 第36-38页 |
| 1.3.1 lncRNA小鼠组织表达谱分析 | 第36-38页 |
| 1.3.2 lncRNA与基因芯片相关基因的分析 | 第38页 |
| 1.4 lncRNA在细胞分化不同时期表达量及与mRNA | 第38-39页 |
| 2 生物信息学分析 | 第39-43页 |
| 2.1 lncRNA的分类 | 第39-40页 |
| 2.2 lncRNA与mRNA基因表达相关分析 | 第40页 |
| 2.3 lncRNA的GO分析 | 第40-42页 |
| 2.4 AK003290的转录因子结合位点与Polycomb反应元件预测 | 第42-43页 |
| 3 细胞转染 | 第43-46页 |
| 3.1 shRNA载体的酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.2 shRNA载体对C2C12细胞转染效果 | 第43-44页 |
| 3.2.1 转染片段浓度条件检测 | 第43-44页 |
| 3.2.2 二次转染 | 第44页 |
| 3.3 siRNA对C2C12细胞转染效果 | 第44-46页 |
| 3.3.1 转染片段浓度条件检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2 转染细胞密度检测 | 第45-46页 |
| 4 siRNA对AK003290基因的干扰效果及相关基因检测 | 第46-49页 |
| 4.1 检测干涉引物效果 | 第46页 |
| 4.2 不同时期干涉效果和相关基因的检测 | 第46-49页 |
| 5 siRNA对AK004418基因的干扰效果及相关基因检测 | 第49-52页 |
| 5.1 检测干涉引物效果 | 第49页 |
| 5.2 不同时期干涉效果和相关基因的检测 | 第49-52页 |
| 6 siRNA对myod1基因的干扰效果及相关lncRNA的检测 | 第52-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-59页 |
| 1 RNAi技术讨论 | 第55-56页 |
| 1.1 siRNA片段的设计要点 | 第55页 |
| 1.2 提高细胞转染效率 | 第55-56页 |
| 2 基因筛选 | 第56-57页 |
| 3 长非编码RNA调控分析 | 第57-58页 |
| 3.1 AK003290和AK004418功能分析 | 第57页 |
| 3.2 长非编码RNA调控机制的预测 | 第57-58页 |
| 4 下一步计划 | 第58-59页 |
| 小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
