| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1.1 大麦黄矮病毒研究现状 | 第14-22页 |
| 1.1.1 概述 | 第14页 |
| 1.1.2 分类地位 | 第14-16页 |
| 1.1.3 基因组结构 | 第16页 |
| 1.1.4 基因功能及表达 | 第16-20页 |
| 1.1.4.1 基因功能 | 第16-18页 |
| 1.1.4.2 基因表达 | 第18-20页 |
| 1.1.5 蚜虫传播 | 第20-22页 |
| 1.2 二穗短柄草研究现状 | 第22-29页 |
| 1.2.1 生物学特性 | 第22-23页 |
| 1.2.2 细胞学特性 | 第23页 |
| 1.2.3 基因组 | 第23-25页 |
| 1.2.3.1 基因组的组装及注释 | 第23-24页 |
| 1.2.3.2 基因组比较分析 | 第24-25页 |
| 1.2.4 遗传转化体系 | 第25-27页 |
| 1.2.4.1 转化 | 第25-26页 |
| 1.2.4.2 T-DNA突变 | 第26-27页 |
| 1.2.5 病毒诱导的基因沉默体系 | 第27-28页 |
| 1.2.6 应用 | 第28-29页 |
| 1.3 病毒与植物寄主的互作机制研究进展 | 第29-32页 |
| 1.3.1 寄主因子参与病毒粒子解体及病毒基因组翻译 | 第29-30页 |
| 1.3.2 寄主因子参与病毒基因组复制 | 第30-31页 |
| 1.3.3 寄主因子参与病毒运输 | 第31-32页 |
| 1.4 蛋白互作研究技术 | 第32-36页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术 | 第32-34页 |
| 1.4.2 Pull-down技术 | 第34页 |
| 1.4.3 免疫共沉淀技术 | 第34-35页 |
| 1.4.4 双分子荧光互补 | 第35-36页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第36-38页 |
| 第二章 BYDV-GAV与二穗短柄草互作体系构建 | 第38-51页 |
| 2.1 引言 | 第38页 |
| 2.2 材料与方法 | 第38-42页 |
| 2.2.1 试验材料及试剂、仪器 | 第38-39页 |
| 2.2.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 2.2.1.2 病毒和蚜虫材料 | 第38-39页 |
| 2.2.1.3 试验试剂 | 第39页 |
| 2.2.2 试验方法 | 第39-42页 |
| 2.2.2.1 植物培养 | 第39-40页 |
| 2.2.2.2 病毒接种 | 第40页 |
| 2.2.2.3 症状观察分析 | 第40页 |
| 2.2.2.4 RNA提取及cDNA合成 | 第40页 |
| 2.2.2.5 PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.2.2.6 血清学分析 | 第41页 |
| 2.2.2.7 透射电镜观察 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-49页 |
| 2.3.1 BYDV-GAV能够侵染二穗短柄草Bd21-3 | 第42-48页 |
| 2.3.1.1 症状观察 | 第42-43页 |
| 2.3.1.2 分子检测 | 第43-44页 |
| 2.3.1.3 血清学分析 | 第44-45页 |
| 2.3.1.4 病毒粒子观察 | 第45-46页 |
| 2.3.1.5 细胞学观察 | 第46-47页 |
| 2.3.1.6 蚜虫传毒实验 | 第47-48页 |
| 2.3.2 BYDV-GAV在小麦和二穗短柄草中的侵染过程比较 | 第48-49页 |
| 2.3.2.1 症状扩展 | 第48页 |
| 2.3.2.2 病毒粒子积累模式分析 | 第48-49页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 酵母双杂交筛选BYDV-GAV与二穗短柄草中的互作蛋白 | 第51-77页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料与方法 | 第51-66页 |
| 3.2.1 试验材料及试剂 | 第51-53页 |
| 3.2.1.1 病毒材料 | 第51页 |
| 3.2.1.2 载体和菌株 | 第51页 |
| 3.2.1.3 试剂 | 第51-53页 |
| 3.2.2 基因克隆方法 | 第53-58页 |
| 3.2.2.1 RNA提取 | 第53-54页 |
| 3.2.2.2 基因扩增 | 第54-55页 |
| 3.2.2.3 回收纯化 | 第55页 |
| 3.2.2.4 T-A连接 | 第55-56页 |
| 3.2.2.5 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第56页 |
| 3.2.2.6 转化 | 第56页 |
| 3.2.2.7 菌落PCR检测 | 第56-57页 |
| 3.2.2.8 质粒提取 | 第57-58页 |
| 3.2.3 酵母文库构建 | 第58-61页 |
| 3.2.3.1 入门文库转化酵母文库 | 第58-59页 |
| 3.2.3.2 文库滴度测定 | 第59页 |
| 3.2.3.3 文库质量检测 | 第59页 |
| 3.2.3.4 酵母文库扩增 | 第59-60页 |
| 3.2.3.5 文库质粒提取 | 第60-61页 |
| 3.2.4 酵母双杂交 | 第61-66页 |
| 3.2.4.1 Gateway入门克隆 | 第61页 |
| 3.2.4.2 诱饵载体构建 | 第61-62页 |
| 3.2.4.3 转化酵母细胞 | 第62-63页 |
| 3.2.4.4 自激活检测 | 第63页 |
| 3.2.4.5 文库筛选 | 第63-64页 |
| 3.2.4.6 报告基因检测 | 第64-65页 |
| 3.2.4.7 猎物质粒挽救 | 第65-66页 |
| 3.2.4.8 序列比对分析 | 第66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-75页 |
| 3.3.1 酵母文库构建 | 第66-68页 |
| 3.3.1.1 文库滴度测定 | 第66-67页 |
| 3.3.1.2 文库质量检测 | 第67页 |
| 3.3.1.3 文库扩繁 | 第67-68页 |
| 3.3.1.4 文库质粒提取 | 第68页 |
| 3.3.2 诱饵载体构建 | 第68-70页 |
| 3.3.2.1 基因克隆 | 第68-69页 |
| 3.3.2.2 入门载体构建 | 第69-70页 |
| 3.3.2.3 诱饵载体构建 | 第70页 |
| 3.3.3 自激活检测 | 第70-71页 |
| 3.3.4 酵母双杂交筛库 | 第71-75页 |
| 3.3.4.1 转化效率 | 第71-72页 |
| 3.3.4.2 文库筛选 | 第72页 |
| 3.3.4.3 报告基因检测 | 第72-73页 |
| 3.3.4.4 筛选结果分析 | 第73-74页 |
| 3.3.4.5 重转化互作验证 | 第74-75页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第75-77页 |
| 第四章 MP与VOZ1的互作验证 | 第77-94页 |
| 4.1 引言 | 第77页 |
| 4.2 材料与方法 | 第77-85页 |
| 4.2.1 试验材料及试剂 | 第77-79页 |
| 4.2.1.1 植物材料 | 第77页 |
| 4.2.1.2 载体和菌株 | 第77-78页 |
| 4.2.1.3 试剂 | 第78-79页 |
| 4.2.2 BdVOZ1基因的克隆 | 第79页 |
| 4.2.3 生物信息学分析 | 第79-80页 |
| 4.2.3.1 多序列比对和进化树分析 | 第79页 |
| 4.2.3.2 蛋白质三级结构预测 | 第79-80页 |
| 4.2.3.3 蛋白亲疏水性分析 | 第80页 |
| 4.2.4 GST pull-down试验方法 | 第80-83页 |
| 4.2.4.1 原核表达载体构建 | 第80页 |
| 4.2.4.2 蛋白表达及纯化 | 第80-81页 |
| 4.2.4.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第81页 |
| 4.2.4.4 Western blot检测 | 第81-82页 |
| 4.2.4.5 GST pull-down实验 | 第82-83页 |
| 4.2.5 双分子荧光互补及亚细胞定位 | 第83-85页 |
| 4.2.5.1 载体构建 | 第83页 |
| 4.2.5.2 农杆菌电转感受态细胞的制备 | 第83-84页 |
| 4.2.5.3 农杆菌电击转化 | 第84页 |
| 4.2.5.4 农杆菌接种 | 第84页 |
| 4.2.5.5 荧光显微镜观察 | 第84-85页 |
| 4.3 结果与分析 | 第85-93页 |
| 4.3.1 VOZ1基因的克隆及生物信息学分析 | 第85-87页 |
| 4.3.2 GST pull-down验证互作 | 第87-90页 |
| 4.3.2.1 融合蛋白的亲疏水性分析 | 第87页 |
| 4.3.2.2 原核表达载体构建 | 第87-88页 |
| 4.3.2.3 GST-MP融合蛋白表达及纯化 | 第88页 |
| 4.3.2.4 MBP-BdVOZ1融合蛋白表达 | 第88-89页 |
| 4.3.2.5 GST pull-down验证互作 | 第89-90页 |
| 4.3.3 亚细胞定位 | 第90-91页 |
| 4.3.3.1 亚细胞定位载体构建 | 第90页 |
| 4.3.3.2 MP的亚细胞定位 | 第90页 |
| 4.3.3.3 VOZ1的亚细胞定位 | 第90-91页 |
| 4.3.4 BiFC验证互作 | 第91-93页 |
| 4.3.4.1 BiFC载体构建 | 第91页 |
| 4.3.4.2 BiFC验证MP与BdVOZ1的互作 | 第91-93页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第93-94页 |
| 第五章 全文结论及展望 | 第94-96页 |
| 5.1 全文结论 | 第94页 |
| 5.2 创新点 | 第94-95页 |
| 5.3 展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-108页 |
| 附录 | 第108-111页 |
| 缩略词 | 第111-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简介 | 第115页 |
