| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 血吸虫概述 | 第11-15页 |
| 1.1.1 血吸虫简介 | 第11页 |
| 1.1.2 血吸虫的生活史 | 第11-12页 |
| 1.1.3 血吸虫病的流行病学及危害 | 第12-14页 |
| 1.1.4 血吸虫病的诊断与治疗 | 第14-15页 |
| 1.1.5 血吸虫的基因组 | 第15页 |
| 1.2 血吸虫中的RNA干扰应用 | 第15-17页 |
| 1.2.1 RNA干扰概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 血吸虫中的RNA干扰途径 | 第16-17页 |
| 1.3 蛋白激酶介绍 | 第17-19页 |
| 1.3.1 蛋白激酶简介 | 第17-18页 |
| 1.3.2 非典型蛋白激酶家族和RIO蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4 Rio2和Polo-like kinase 1 的相互作用 | 第19-20页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-38页 |
| 3.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第21页 |
| 3.1.2 菌种与质粒 | 第21页 |
| 3.1.3 主要试剂和酶 | 第21-22页 |
| 3.1.4 溶液的配制 | 第22-24页 |
| 3.1.5 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-38页 |
| 3.2.1 日本血吸虫成虫的收集 | 第24-25页 |
| 3.2.2 引物的设计与合成 | 第25页 |
| 3.2.3 日本血吸虫总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.2.4 总RNA反转录为cDNA | 第26页 |
| 3.2.5 PCR扩增日本血吸虫Rio2基因及Plk1基因片段 | 第26-27页 |
| 3.2.6 琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段大小 | 第27页 |
| 3.2.7 PCR产物的纯化回收 | 第27-28页 |
| 3.2.8 目的DNA连接p MD19-T载体 | 第28页 |
| 3.2.9 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第28页 |
| 3.2.10 连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第28-29页 |
| 3.2.11 菌液PCR鉴定 | 第29页 |
| 3.2.12 质粒DNA的中量提取和鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.13 线性DNA模板制备 | 第30-31页 |
| 3.2.14 体外转录双链RNA | 第31-32页 |
| 3.2.15 日本血吸虫体外RNA干扰 | 第32页 |
| 3.2.16 荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 3.2.17 EdU细胞分裂检测 | 第33页 |
| 3.2.18 盐酸卡红染色及共聚焦观察 | 第33页 |
| 3.2.19 虫卵计数 | 第33-34页 |
| 3.2.20 Rio2截短蛋白的原核表达 | 第34页 |
| 3.2.21 BCA法测蛋白浓度 | 第34-35页 |
| 3.2.22 蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35页 |
| 3.2.23 日本血吸虫Rio2蛋白多克隆抗体IgY的制备 | 第35-36页 |
| 3.2.24 ELISA测定多抗血清效价 | 第36页 |
| 3.2.25 日本血吸虫组织蛋白提取 | 第36-37页 |
| 3.2.26 Western-Blot | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-58页 |
| 4.1 日本血吸虫Rio2和Plk1基因的双链RNA制备 | 第38-43页 |
| 4.1.1 日本血吸虫总RNA提取 | 第38-39页 |
| 4.1.2 从日本血吸虫cDNA中扩增Rio2和Plk1基因模板 | 第39-40页 |
| 4.1.3 获得pMD 19-T-Rio2和pMD 19-T-Plk1质粒模板 | 第40-41页 |
| 4.1.4 单酶切获得带有启动子的线性DNA模板 | 第41-42页 |
| 4.1.5 体外转录获得双链RNA | 第42-43页 |
| 4.2 日本血吸虫Rio2和Plk1基因的体外RNA干扰实验荧光定量结果 | 第43-45页 |
| 4.3 RNA干扰实验表型分析 | 第45-55页 |
| 4.3.1 干扰后血吸虫体长测量结果 | 第45-46页 |
| 4.3.2 干扰后血吸虫虫卵计数结果 | 第46页 |
| 4.3.3 干扰后EdU检测细胞有丝分裂增殖情况 | 第46-51页 |
| 4.3.4 干扰后共聚焦显微镜观测表型 | 第51-55页 |
| 4.4 Rio2卵黄抗体IgY的制备 | 第55-56页 |
| 4.5 抗日本血吸虫截短蛋白Rio2卵黄抗体的免疫反应性检测 | 第56-58页 |
| 4.5.1 血吸虫组织总蛋白的提取 | 第56-57页 |
| 4.5.2 原核表达蛋白及日本血吸虫天然蛋白的Western blot | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-62页 |
| 5.1 RNA干扰及表型分析 | 第58-61页 |
| 5.2 本课题未能获得显著的Rio2干扰表型的原因 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
